乌贼墨对小鼠腹巨噬细胞及脾细胞no、ifn-γ产生水平的影响.pdfVIP

中文摘要 前 言 f7 妈贼墨，系乌贼在遇到天敌时从墨囊中释放出来的一种自身 保护性物质，含有大量的黑色色素颗粒。九十年代初，日本学者发 现乌贼墨具有高效的抗肿瘤活性，随后国内外的研究学者对其抗 肿瘤的免疫和作用机理进行了研究，以便对乌贼墨进行开发利用， 用于抗肿瘤及增强免疫功能。 关于其抗肿瘤作用机制，国内研究较多，主要集中在免疫调节 功能方面。本实验室在乌贼墨及其提取物对小鼠非特异免疫和特 异性免疫功能的影响等方面作了较为系统的研究。 吕昌龙等实验结果表明：乌贼墨具有刺激和增强巨噬细胞 (1nAcrophageM‘P)活性的作用，能够显著提高小鼠血清中TNF 细胞的杀伤活性也有促进作用。进一步指出了乌贼墨的抗肿瘤作 用是由于免疫系统功能增强，特别是细胞免疫功能增强的结果。 综上所述，乌贼墨及提取物具有显著的抗肿瘤活性，但其并没 有表现出对肿瘤细胞直接的细胞毒活性，提示其是通过刺激机体 、免疫系统间接发挥抗肿瘤作用。在已经证嘎乌贼墨及其提取物能 够诱导上述细胞因子和效应细胞调节免疫功能的同时，也不能排 除其在诱导过程中还产生其它效应分子和效应细胞，通过相互调 控，协同发挥抗肿瘤作用的可能性。 近年来的研究表明有一种新的M9细胞毒效应分子，即一氧 oxide 化氮(nitricNO)，是一种无机小分子，它在活化的M‘P杀伤 肿瘤细胞的效应中起着重要的作用，是一种新发现的抗肿瘤分子。 N0的诱导合成是活化的M单杀伤肿瘤细胞的主要机制，多种细胞 因子可诱导M单合成大量的NO，研究结果表明，IFN一1具有明显 的诱导效应，可促进M‘P合成大量的N0。N0与鸟贼墨抗肿瘤作 用机制之间是否存在必然联系，目前尚不清楚j奉论文作为这一 系统研究课题的一部分，在以往研究的基础上，就乌贼墨对小鼠巨 噬细胞NO生成的影响进行了研究，同时检测了IFN一-y产生水 平。进一步证实IFN一1对NO产生的影响。 ， ／ 材料与方法 f ＼取30只C57BL／6系小鼠，分6组，每组5只，其中5组为实验 组，每只灌胃5％浓度乌贼墨0．51nl／次，一次／天，另外一组为对照 组，同法给予生理盐水。分别在乌贼墨灌胃后的第0天、第2天、 第4天、第6天、第8天取小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞进行培养， 应用Griess法间接测定细胞培养上清中No；含量及应用ELISA 法测定细胞培养上清中IFN一1的含量。另外，乌贼墨灌胃后第6 天小鼠脾细胞单独、贴壁细胞、非贴壁细胞、加入LPS及加入L— NMMA进行培养，观察其产生NO水平。 实验结果 1．乌贼墨对小鼠脾细胞产生NO的影响 应用Grisee法检测乌贼墨灌胃后第4天小鼠脾细胞培养上清 v．mol／L)，第6天达到高峰 中NO；含量开始升高(4．4±0．74 (9．1l±O．88 l咀mol／L)。乌 v,mol／L)，然后开始下降(4．1±0．79 贼墨灌胃后第4、6、8天脾细胞培养上清中NO；浓度与对照组(2． 5±1．0 panol／L)比较有显著升高(PO．01)。 2．乌贼墨对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响 应用Griess法检测乌贼墨灌胃后第4天小鼠腹腔巨噬细胞培 vt,rnol／L)，然后开始下 养上清中No；含量达到高峰(3．06±0．29 降。乌贼墨灌胃后第4、6天小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中No； 浓度与对照组(o．63±0．2p．mol／L)比较有显著升高(Po．05)。 ·2· 3．LPS和L—NMMA对乌贼墨灌胃后第6天小鼠脾细胞NO 生成的影响 通过不同的细胞培养，测定培养上清中NO；浓度，u强对小 鼠脾细胞NO生成具