人绒毛膜促性腺素α亚基cdna克隆、表达及纯化.pdf

人城毛膜促性腺激素Ⅱ亚基eDNA克隆、表达及纯化 中文摘要 人绒毛膜促性腺激素Q亚基eDNA克隆、表达及纯化 中文摘要 目的 从人绒毛膜组织中克隆人绒毛膜促性腺激素Q亚基(HCG Q Ⅱ)cDNA，构建表达载体并进行了表达、纯化，为进一步研究HCG 在多种肿瘤及异常妊娠中的作用及为后续以噬菌体抗体库技术生产 HCG Q单克隆抗体作前期准备。 方法提取新鲜人绒毛膜组织总RNA，利用RT—PCR技术扩增出HCG d a， 列正确，并转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达融合蛋白GST—HCG 并通过改变培养条件诱导表达蛋白改变表达形式。超声破菌后上清经 谷胱甘肽Sepharose4B亲和层析纯化，沉淀包涵体经变性、透析复 性等处理，用SDS—PAGE电泳、Western印迹分析产物。 结果琼脂糖凝胶电泳结果显示RT—PCR扩增片段大小约280bp，同 预期片段相符。SDS—PAGE电泳显示诱导表达的产物经初步处理后有 36KD左右一条明显新增条带，与预期分子量相符，Western印迹证 实此结果。融合蛋白主要以包涵体形式存在，通过改变培养条件减少 融合蛋白包涵体的形成。 Q 结论本实验成功地从人绒毛膜组织中克隆出HCGcDNA，克隆基因 在大肠杆菌中获得了较高水平的表达，表达产物有较好的免疫特异 人绒毛膜促性腺激素Ⅱ亚基eDNA克隆、表达及纯化 中文摘要 性。 关键词人绒毛膜促性腺激素Q亚基；克隆；大肠杆菌：表达；纯化 作 者 金东华 指导老师 诸葛洪祥 徐培君 1l 人绒毛膜促性腺激素a亚基cDNA克隆、表达及纯化 英文摘要 CI oni i on onofthe and i fi cati cDNA ng，expressput forthe human chorioniC gonadotropin subun i tQ(HCGQ) Abst ract a clone subunit To humanchorionic Objective gonadotropin the ion and (HCGa)cDNA，construct vector，express