人红白血病转基多药耐药细胞k562mdr耐药性的逆转及机制的研究.pdf

人红白血病转基因多药耐药细胞K562／MDR 耐药性的逆转及机制的研究 硕士研究生：张蕊 指导教师：孔力 教授 专业名称：人体解剖与组织胚胎学 摘 要 肿瘤及白血病临床化疗失败的主要原因之一是肿瘤细胞产生的耐药性。因此， 如何成功地逆转多药耐药是当前肿瘤治疗学中的一个研究热点。多药耐药 (multidmg 血病MDR是当今亟待解决的问题。目前许多药物可以用来逆转肿瘤细胞的MDR， 但不能从根本上解决问题，效果欠佳，而且具有一定的毒副作用，在临床应用有 一定的局限性。 移植患者，同时还发现其可增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。CsA是最早用于 耐药逆转研究的，且为体外实验效果最好的经典药物之一。国外已进入二期临床 试验，国内赵春事等入首次用CsA梳床逆转白血病成功。但因其逆转耐药的作用 有明显的剂量效应，体内用药剂董相对较大，毒副作用增加，及其价格昂贵等限 制了临床应用。从临床考虑ⅧR逆转的新策略是联合应用逆转剂。川芎嗪 钙通道阻滞剂，体外逆转白血病细胞株取得了较大进展，其作用温和，毒副作用 少。本实验诣在研究砥佃与CsA联合逆转通过基因转移技术获得的仅具有经典 MDR表型的人红白血病多药耐药细胞K56帅R的多药耐药性，并进一步探讨其 耐药逆转机制，以期获得具有II盘床应用价值的耐药逆转剂a 通过基因转移方法获得仅有P．印高表达、具经典姗DR表型的K562，MDR细 胞，作为本研究模型来研究白血病细胞MDR的逆转机制。以K562／MDR细胞DNA 为模板傲PCR扩增出与己知MDRl基因阳性的入乳腺瘸耐阿霉素细胞 作为本研究对象。结果表明：n，口的非细胞毒性剂量为320峙，IIll，低毒剂量为1250 化疗药物浓度，从而逆转耐药细胞K562，MDR对ADM的耐药性。 在上述实验的基础上，我们对TMP与CsA实现其逆转作用的具体机制进行了 进一步研究，为P一印拮抗剂的研究提供依据。 目前，对于MDR机制的研究己日趋深入，而且也建立了较为完善的理论体系。 对经典MDR的研究发现，多药耐药肿瘤细胞的一个明显生化特征是细胞膜上P—gp 的过度表达。血液系统恶性肿瘤MDR的发生仍属于经典的MDR范畴，有多种因 素参与，为了准确研究逆转结果，我们采用转基因方法获得的仅有P-gp高表达、 泵功能，能将结舍的药物分子，在其核苷酸结合位点连上的ArP水解释放能量的 作用下，转移到细胞外，使胞内侧药物浓度始终维持较低水平，细胞由此获得耐 药性。本实验应用半定量RT．pCR方法检测了Th佃和csA单独和联合应用对 和持续作用的CsA单独应用能下调MDRl基因的表达。这一结果提示，作为钙通 道阻滞剂的TMP是通过增加耐药细胞内化疗药物浓度，下调P．gp表达，从而影 作用，使CsA持续作用于K562，泗R细胞(5天)，提高胞内药物浓度，下调其 果更明显。利用流式细胞仪的间接免疫荧光染料检测P—gp的表达。半定量RT_PcR 结果的图像分析数据有统计学意义。 本硬究中，TMP瓤csA单甩或联用提高了Ks62撇细胞内药物浓度。可逆 转MDR，与文献报道相近，效果良好。CsA短暂应用能增加细胞内的药物浓度， 本文考虑为影响耐药缅胞膜上P．gp泵功能，但并未下调MDRl基因韵表达，而持 续作用的csA才可下调MDRl基因和P．gp的表达，其具体机理有待进一步研究a 2 能，有临床应用价值。 关键词：川芎嗪 环孢菌素A 多药耐药逆转 K562／MDR细胞RT—PcR of in ReVersing the human drug-resist3nce resistant multidrugcellswith transfer gene K562／MDRl aⅡdthe cOrrelative