人脱细胞羊膜复脂肪源性干细胞修复大鼠全层皮肤损伤的实验研究.pdf

目录 ／㈣ 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………-1 英文论著摘要……………………………………………………………………·4 二、英文缩略语…………………………………………………………………………6 三、论文 刖舌…………………………………………………………………………………………………………‘‘7前言…………………………………………………………………………………………………………·7 材料与方法………………………………………………………………………·7 实验结果…………………………………………………………………………“9 讨论………………………………………………………………………………………………………”22 结论………………………………………………………………………………………………………一23 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………24 五、参考文献…………………………………………………………………………25 六、附录 综述……………………………………………………………………………………………………”27 在学期间科研成绩………………………………………………………………37 致谢…………………………………………………………………………………………38 个人简介…………………………………………………………………………39 ·中文论著摘要· 人脱细胞羊膜复合脂肪源性干细胞修复大鼠全层皮 肤损伤的实验研究 目 的 皮肤具有重要的物理、化学及生物学屏障功能，皮肤创伤所引起的局部或全 身损害均与皮肤屏障的丧失有关，尽早修复缺损皮肤并最大可能恢复功能与外观 已成为治疗重要目标。传统修复方法有：自体植皮、同种异体植皮、异种植皮和 人工合成皮肤产品的应用。但由于供区不足、免疫排斥及传播疾病等缺点，使其 应用受到限制，寻找一种理想的皮肤替代物一直是临床上一个亟待解决的难题。 真皮在皮肤损伤的修复过程中具有重要作用，选择合适的种子细胞和支架材 料来构建真皮替代物尤为重要。羊膜的研究由来已久，应用羊膜来构建软骨、角 膜、周围神经桥接物、肌腱、血管及皮肤已见报道，而应用脱细胞羊膜作为支架 材料构建真皮比羊膜更具有独特的优势。脱掉细胞成分使其无免疫原性，所含的 I、Ⅳ型胶原蛋白、层粘连蛋白、纤维粘连蛋白及硫酸肝素蛋白多糖等成分有利 于细胞的黏附、移行及上皮化，防止细胞凋亡；此外它来源广泛、取材方便、易 于处理和保存。 干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞两大类，其中胚胎干细胞因涉及伦理学 问题导致研究应用受到限制。较常用的成体干细胞目前主要包括脂肪源性干细胞 疼痛，同时也存在一定的风险；采用吸脂术获取ADSCs具有对供区损伤小、风险 低、容易获得、易于培养、减少患者紧张焦虑情绪等诸多优点。此外，在体外不 同诱导条件下，ADSCs可以被诱导为脂肪、骨、软骨、肌及神经等前体细胞，具 有多向分化潜能，因此是理想的种子细胞。 本实验我们将研究人脱细胞羊膜(HAAM)与ADSCs的生物相容性，并探 讨HAAM负载ADSCs构建真皮替代物修复全层皮肤缺损的可能性。 实验材料和方法 取健康4月龄SD大鼠，体重250--．，300克，雌雄不限，麻醉、脱毛、消毒，于 腹股沟处获取脂肪后进行ADSCs的体外分离、培养和传代；取第3代细胞常规HE 染色，行CD44、CD49d、CD34免疫细胞化学染色鉴定。应用物理和酶消化法处 理人羊膜获得HAAM，HE染色验证细胞成分去除干净，扫描电镜观察HAAM的 培养1～5天后分别进行扫描电镜和MTT检测。 取SD大鼠30只，随机分为A、B、C--组，建立背部全层皮肤损伤模型。A 包扎，术后行大体观察，于l、2、4N计算创口愈合率并取创面皮肤进行组织学 观察。 所得数据用均数4-标准差p土j)表示，应用SPSSl6．0统计软件，采用单因素方 差分析进行组间比较，PO．05为有统计学意义，PO．01为有显著统计学意义。 实验结果 常规HE染色可见细胞呈长梭形，细胞核为椭