人运动神经元生蛋白tudor功能域片段的克隆，表达.pdf

天津医科大学硕士研究生论文中文摘要 摘 要 目的：构建含有人SMNTudor基因片段的原核表达质粒，并在大肠杆菌中 大量表达，从而与p100Tudor片段结构和功能进行比较． 方法俐用聚合酶链反应口cR)方法，扩增出人SMNTudor基因序列，并 与原核表达载体pGEX-4T-1连接形成重组质粒转化至作为质粒的宿主菌大 肠杆菌BL21株中，经IPTG诱导融合蛋白表达并用还原型谷胱甘肽s转移 酶特异性结合球珠纯化融合蛋白。用同样的方法表达p100Tudor蛋白片段 融合蛋白。SMN Tudor融合蛋白分别与HeLa细胞 Tudor融合蛋白与p100 核裂解液中蛋白结合，并进行比较． 结果：PeR法获得SMN Tudor基因序列，长度为183bp，成功构建了表达 载体pGEx的重组质粒。重组质粒pGEX-4T-SMNTudor经PCR鉴定，酶 切鉴定和测序后在大肠杆菌BL21株中成功表达GST-SMNTudor融合蛋白． Tudor片段与SM／q 通过比较可以看出p100 Tudor片段结合HeLa细胞核裂 解液蛋白种类并不完全相同． Tudor并表达出融合蛋白，SMN 结论：构建了表达载体pGEX-4T-SMN Tudor蛋白片段与p100Tudor蛋白片段结合核蛋白种类不尽相同。本研究 为下一步比较研究p100蛋白和SMN蛋白功能域片段功能奠定基础。 关键词：SMN蛋白，p100蛋白，Tudor功能片段，重组质粒，pGEX载体 蛋白表达 Abstract and the ofTudorofhuman fragment Cloningexpression SMN sequence the vector the Objectire：Constructlagexpressioncontaining ofSMN orderto thefunctionofSMNTudor sequenceTudor，in compare with Tudor． p100 Methods：DNA toTudorofhumanSMNwas fragments ing correspond PCR Wereinsertedintothe generatedby amplification。Thefragment VCCtor andthentransformedto最cellstrainDH5a．After pGEX-4T-1 identified1imited and the sequenced by cuttingenzymedigesting BL21 vectortransformedinto层coIistrainagain．Theexpression ofGSTSMNTudorfusion wasinducedIPTGandthen protein