人重组白介素1在毕氏酵母中的表达及其体外诱导dc分化作用的研究.pdf

一 ．厶重氢自鲴童盒蠢i3在生医硅受虫煦壹盗盈甚捶矬落璺壁￡盆监位置曲班宜——————————型攫 人重组白细胞介素13在毕氏酵母中的表达及其体外诱 卜+7≥0、勺 导Dc分化作用的研究 研究生：江阳 导师：张学光 + 摘 要 。白细胞介素13是在1993年被命名的一种由活化TH2细胞分泌的细 胞因子。其生物学活性与白细胞介素4有许多相似之处，可抑制单核细 胞释放炎症因子；促进B细胞繁殖和转化；抑制HIV—i病毒的复制和肿 瘤的生长，对某些上皮细胞瘤具有高度毒眭。临床上IL一13在许多疾病， 特别是在变态反应性疾病，如哮喘的病理发展过程中有重要作用。鉴此， 其在实验和临床应用中的作用倍受关注。 为了获得高效表达人IL-13的表达菌株，生产具有生物学功能的 IL一13，并研究其在体外诱导DC的作用，我们应用毕氏酵母表达系统表 达人重组IL-13，经分离纯化后，对其生物学潘陛进行测定，并就其在 体外诱导Dc的作用及机制进行研究。 重组人IL-13在毕氏酵母中的表达 我们根据文献报道的人I卜13基因序列，并充分考虑到酵母菌蛋白 质合成时密码子的偏爱|生，在不改变IL一13蛋白质序列的前提下，人工 合成6条IL—13基因片段和5条连接片段，经加磷反应、连接反应、PCR 的全长片段，将其连接至克隆载体pSK中，测序正确后，再将IL-13基 aA，获得用于酵母表达IL-13的重 因片段连接至酵母表达载体pPICZ 0 组质粒pPICZ 线性化，再电转化至毕氏酵母菌株GSIl5中，经Zeocine加压筛选后， 获得表达量相对较高且分泌稳定的rhIL一13基因工程菌株。应用全自动 发酵装置进行发酵，表达上清中目的蛋白的表达量达25mg／L。对上清 经透析、超滤浓缩、上柱，分离纯化获得高浓度的IL—13蛋白质(纯度 95％)。 厶t组自鲴直众蠢≥≥在生医蔓量生曲蠹盗叠甚隹赴遗璺坠￡娃化佳田啦班宜 擅量 二．重组人IL-13的生物等黜的测定及其对Dc的诱导作用 根据报道我们用艮。细胞株来检测毕氏酵母表达的人重组IL—13与 标准品IL-13，结果表明我们用毕氏酵母表达的人重组IL一13达到标准 品生物学活性要求，以剂量依赖的方式刺激B㈦。细胞株增殖。IL一13与 IL_4在许多生物学功能上相似，IL-4在体外可诱导外周血单核细胞向 实验发现IL～l 3也同样有体外诱导外周血单核细胞向Dc增殖分化的作 用，表型分析MHCII、CDl 巴细胞反应刺激T细胞增殖的作用与IL一4诱导得的成熟DC并无显著差 别，未成熟DC的摄取抗原的能力也很强。因此IL-13为体外诱导Dc提 供了一条有效途径。7 关键词：重组人IL—13；基因工程；毕氏酵母；表避；纯化；Bq。 细胞株；诱每；树突状细胞 厶l组自鲴童企蠢；§在生医鞋墨生曲蠹达厦甚佳赴迸墨立￡盆位佳盟曲妥宜—————————世巫堕盟 inPichia humanIL-13 recombination of Expression ofDefrom ontheinduction itseffect and pastoris Abstract Postgraduat