体内pig-a因突变检测方法研究.pdfVIP

目 录 中文摘要 1 Abstract 3 第一章 前言 7 第二章 SD 大鼠 Pig-a 基因突变检测方法的建立 11 第一节 SD 大鼠Pig-a 基因突变检测方法的建立 11 1.1 材料和方法 11 1.2 实验结果 13 1.3 讨论 15 第二节 SD 大鼠经 ENU 和 DMBA 暴露后 Pig-a 基因突变发生率 17 2.1 材料和方法 17 2.2 实验结果 18 2.3 讨论 19 第三节 SD 大鼠自发和诱发产生Pig-a 基因突变与其周龄的关系 21 3.1 材料和方法 21 3.2 实验结果 22 3.3 讨论 23 第四节 SD 大鼠Pig-a 基因突变检测方法评估 25 前言 25 4.1 样本重复性分析 25 4.2 仪器稳定性分析 25 4.3 染色细胞稳定性分析 26 4.4 血液样本稳定性分析 26 4.4 流式细胞仪检测准确性评估 27 4.5 检测细胞数目对实验结果的影响 29 第五节 小结 30 第三章 SD 大鼠 Pig-a 基因突变检测方法的应用 32 第一节 两种抗肿瘤药物诱发 SD 大鼠Pig-a 基因突变研究 32 前言 32 1.1 顺铂注射液对 SD 大鼠Pig-a 基因突变的影响 32 1.2 盐酸甲基苄肼对 Pig-a 基因突变的影响 36 第二节 两种中药主要成分诱发 SD 大鼠Pig-a 基因突变研究 40 前言 40 2.1 材料和方法 40 2.2 实验结果 41 2.3 讨论 43 第三节 小结 44 第四章 SD 大鼠 Pig-a 基因突变检测 RET 方法的建立 46 前言 46 1.1 材料和方法 46 I 1.2 实验结果 48 1.3 讨论 52 第五章 综述 54 缩略语中英对照 62 致谢 63 版权申明 64 II 中文摘要 随着新药不断上市及对药品安全性的日益重视，作为药物非临床研究的重要组成部 分的遗传毒性检测，其检测新技术和新方法的开发成了当务之急。遗传毒性研究包 括体内实验和体外实验，采用不同的实验系统预测和评价药物的潜在遗传毒性，从 而降低药物在人体临床实验中的风险。 遗传毒性试验中的体内实验非常重要，尤其体现在后续实验策略对试验方法的 选择上，ICH 、OECD 关于遗传实验的指导原则对此有很明确的阐述。同时，为了 体现动物实验的 3R 原则，在开发新的体内实验方法时尽可能将其结合在一般毒性 实验中，实现多终点检测，最终达到减少动物使用量的目的。本研究针对现阶段遗 传毒性研究的现状，建立新的遗传毒性体内检测基因突变的快捷方法，以达到上述 目的。 本研究为建立 SD 大鼠体内 Pig-a 基因突变实验方法开展了相关基础研究，并 将其应用于药物安全性评价中。Pig-a 基因是糖化磷脂酰肌醇（Glycosylphosphatidyl inositol，GPI ）合成的关键基因，GPI 合成障碍会导致细胞表面 GPI 锚连蛋白（CD59、 CD55、CD48 等）缺失或缺损，突变表型细胞发生率（即 RBCCD59-发生率）可通过 流式细胞仪检测得到，进而得到 Pig-a 基因突变率。 1. 研究目的和方法 本研究分包括 Pig-a 基因突变实验方法的建立和 Pig-a 基因突变实验方法的应 用二部分。研究内容如下： 第一部分：实验方法的建立和优化。