人参总皂甙对d半乳糖衰老模型大鼠海马生长抑素阳性神经元表达的影响.pdf

堑堑态堂亟±堂焦i盆塞———— 人参总皂甙对m半乳糖衰老模型大鼠海马 生长抑素阳性神经元表达的影响 浙江大学湖滨校区人体解剖与组织胚胎学 98叛硕士研究生 郑荣昌 导 师 孙百强 摘要 缶关衰老的研究在基础和临床医学中都是一个被重视的课题。随着 社会人口老龄化，有关衰老尤其是脑衰老的研究，已经成为研究的热点。 在探讨脑的衰老变化机理研究中，脑内生长抑素(Solatostatin，SS) 的变化是人们颇为关注的神经肽之一。ss为环状14肽，与学习记忆密切 相关，目前研究已确认，海马结构内的ss神经元与垂体前叶生长激素的 分泌和释放活动没有直接关系，而与学习、记忆密切相关，具有抗遗忘 作用，是记忆的物质基础，已有研究资料表明，老龄大鼠海马ss水平低 、 下，ss阳性神经元密度降低。r—r一一 ， 人参总皂甙是传统中药人参的主要有效成分之一，具有人参的主要 生理活性，近年来有关人参总皂甙抗衰老研究十分热门，已有研究资料 表明，人参总皂甙可以有效延缓神经系统机能的老龄性退变。然而，有 一1一 塑堑太堂亟±堂焦盈塞．一—— 关人参总皂甙对衰老大鼠海马内!璺煎丝丞作用的研究，国内外未见报道。 本课题采用D-半乳糖亚急性中毒衰老模型大鼠，应用免疫组化^Bc法检测 大鼠海马ss阳性神经元分布，观察人参总皂甙对衰老大鼠海马生长抑素 —P一—_一 变化的影响，探讨人参总皂甙的抗衰老作用! 卜、材科和方法 f (一)动物分组 18只Wistar大鼠(雄性，体重265±369，四月龄)，随机分为对照 组、造模组和给药组三组，每组6只。 (二)衰老模型的建立及给药 造楱组：皮下注射D_半乳糖(48mg／kg‘d)6周。 给药组：皮下注射沪半乳糖(48mg／kg’d)同时给予人参总皂甙灌胃 (50髓g／kg‘d)6周。 对照组：皮下注射生理盐水(Zml／kg’d)6周。 (三)取材、固定、切片 各组大鼠经戊巴比妥钠(46mg／kg)腹腔注射麻醉，开胸，经左心 室锅多聚甲醛缓冲液灌注取脑，入4％多聚甲醛缓冲液后固定6-84,时， llⅢ。 常规脱水、浸蜡、包埋，Leitz切片机鼠脑冠状位连续切片，片厚5 (四)免疫组化柚c法检测ss 采用华美公司提供的全组分ABC免疫组化检测试剂盒，一抗为兔抗ss 血清(二军大神经生物学教研室)，1：1500稀释，结合时闯：湿盒中4 ℃过夜。其余操作按试剂盒说明书进行。 DAB染色、复染封片，01ympus光镜下观察。 一2一 堑堑太堂亟±堂僮硷塞 ABc法染色的同时，分别做阳性对照和阴性对照。 (五)图像分析 BH2显微镜IOX10下， 每个标本选择2张相同断面的切片，在Olympus 用JVC Digital (采样过程中保持光源亮度恒定，以保证各组切片光密度的可比性)， 采样结果输入计算机，应用HPIAS—1000(高清晰度病理图文分析系统， resolution High PathologicalImage System，同济医科大 AnalysiS 学)进行图像分析，测定ss阳性神经元的积分光密度。在Olympus显微镜 下用测微尺计数sS阳性神经元(个／mm2)。 (六)数据处理及统计分析 数据以平均数±标准差表示，用SPSS 8．O统计软件进行 ANOVA)。 单因素方差分析(one