受体介导的甘露化蛋白抗原的摄取、递呈及淋巴细胞激活.pdf

受体介导的甘露糖化蛋白抗原的摄取、递里及淋巴细胞激活 摘要 以T淋巴细胞为主的细胞免疫应答在机体的抗肿瘤机制中起着至关重要的作 用。在产生细胞免疫应答的过程中，抗原的特性和树突状细胞(DC)的功能状态是 抗原呈递的关键。随着DC的成熟，DC诱导T淋巴细胞应答的能力亦增强。F1前， 基于Dc的肿瘤疫苗研究是肿瘤免疫治疗研究领域的热点。 原癌基因肛R一2／neu的产物在人类多种上皮来源的肿瘤细胞中异常过表达，它 参与了肿瘤的发生、发展及恶性化转移，而在正常组织和细胞中，HER一2，neu则低 表达或不表达。因此，胍R一2，neu是免疫治疗的良好靶分子。既R一2／neu配体结合 表嘶甘露糖受体可介导高效的抗原内化，我们表达、纯化了HER一2／neuRLD2蛋白， 并对其进行了甘露糖修饰，以增强Dc对抗原的摄取、呈递，促进Dc成熟，进+ 步增强针对抗原的细胞免疫应答，从而为新型甘露糖化肿瘤疫苗的研制提供理论依 据。 本课题研究的主要内容包括： 第一部分RLD2蛋白表达及纯化 阳性转化克隆，并获得T仃【A与RLD2蛋白在大肠杆菌中的可溶性共表达。表达产 物经免疫印记分析可被抗髓R捌neu特异性抗体识别。经离子交换层析和镍亲和层 析纯化，RLD2蛋白的纯度达85％。用质谱法分析RLD2蛋白的分子量，与预期大 小相符。强R一2，neuRLD2蛋白的高效可溶性表达为蛋白抗原的甘露糖化修饰打下了 基础。 第二部分RLD2蛋白的糖基化制目和荧光素标记 采用化学方法对纯化的RLD2蛋白(L2)进行了甘露糖化修饰，通过质谱法对 糖基化产物进行分析。结果显示，RLD2拟糖蛋白(mL2)在质谱图上呈现甘露糖 修饰蛋白的分子量预期峰形。随后对修饰与未修饰的蛋白用FⅡ℃标记，以利于下 一步甘露糖化受体介导的DC抗原摄取和提呈的实验研究。 第三部分人外周血来潭DC的诱导 从健康志愿者的外周血中分离单个核细胞，经mGM—CSF、rh几一4及脂多糖 (LPs)的诱导获得DC，应用流式细胞术对Dc成熟的特征进行了分析。 第四部分糖基化抗原诱导DC成熟及促：进抗原摄取的研究 将荧光素标记的糖基化或未糖基化抗原(mL2及L2)分别作用于未成熟DC， 通过流式细胞术分析Dc表型的变化及抗原摄取，发现mL2能够通过甘露糖受体介 导的内化途径促进DC的抗原摄取效率，并能有效地促进DC成熟。 第五部分糖基化抗原增强Dc诱导的特异性抗肿瘤效应 用糖基化抗原冲击未成熟DC，可强有力地刺激T细胞的增殖反应，诱导T细 胞分泌细胞因子Ⅱ刑一Y，并可在体外特异性地杀伤表达呱R．2，neu的肿瘤细胞。 本研究为糖基化RL，D2蛋白作为治疗性疫苗的体内研究奠定了基础。 关键词：甘露糖受体， 树突状细胞， 抗原呈递， 肿瘤免疫 4 MaturationofdeⅡIlriticceUsandenhancedCTLreaction induced RLD2 emciently byInannosylated Abstract a11d dcn“tic in Thenamreof functionalstateof cells(DCs)areiInpor咖t a11tigens OfDCsformeinductiOn0fTcdl is antigenpreseⅡt{ldon．Theabmty responsespmmoted manlra垃on．nhasbeencon缸mledmatmannose mediateemcient by rec印torS h噜hly