微小按蚊复合体na内转录间隔2区序列差异分析及遗传多态性研究.pdf

微小按蚊复合体核糖体DNA内转录间隔2区序列差异分析及遗传多态性研究 中文摘要 微小按蚊复合体核糖体DNA内转录间隔2区序列 差异分析及遗传多态性研究 硕士生：史慧勤 导师：赵彤言 中文摘要 minimusTheobald 微小按蚊(Anopheles 1901)主要分布于我国海 云南、广西、福建、台湾等北纬250以南山区和丘陵地区以及东 南亚国家，是疟疾的主要传播媒介之一。国内外学者经过长期研究认 为微小按蚊为一复合体，但由于所选择的分类标准不同(如形态特征、 生态习性、细胞核型、同工酶以及DNA分子特征等)，因而所得出的 结论也没有统一性：有分为A、B型；或分为A、B、c型；还有其它 隐型存在的可能。而不同型别的微小按蚊在嗜血性、栖息性、季节消 长性、对疟原虫敏感性以及对杀虫药剂敏感性方面存在不同程度的差 异，正确区分微小按复合体成员对于研究该蚊及制定有效的防疟措施 具有重要流行病学意义。弋 近年来核糖体DNA钠转录间隔2区序列差异分析被认为是区分 按蚊复合体比较稳定、可靠的分类技术，本研究应用这一方法对我国 存在一定程度地理隔离的微小按蚊广西龙胜株、云南思茅株、勐腊株、 元江株、海南文昌株、保亭株6个地理株和越南Caonguen株进行了 PCR扩增和序列差异分析比较；并对ITS2区序列差异最大的地理株 的线粒体DNA16S编码区进行了比较，目的是从分子水平上探讨我 国微小按蚊复合体的分类地位以及遗传亲缘关系，为疟疾媒介的分类 学研究提供更多的实验依据。另外在rDNA--ITS2区序列差异分析的 基础上，对微小按蚊复合体的分型方法做了进一步的改进，使之更加 快捷、经济，以便能更好地适应疟疾防制实际工作的需要。 (本研究获得的结果如下： 、≮、 微小按蚊复合体核糖体DNA内转录间隔2区序列差异分析及遗传多态丝堑壅 ±苎塑墨 0～2bp。 2． 将各地理株的ITS2区序列进行比较，发现序列碱基变化包括转 换、颠换、缺失或插入，主要集中在28SrDNA编码区附近。地理株间 差异程度不同，以元江株与其它地理株差异最大(5．3～6．1％)；其次为 而思茅株、勐腊株和保亭株、文昌株四个地理株之间的同源性很高 (99．5～100％)，差异很小。 3．结合GeneBank中微小按蚊复合体其它同区序列作同源性分析，用 Clustal方法构建聚类关系树，发现我国存在微小按蚊A、C型：云南 元江株为微小按蚊c型；而云南思茅株、勐腊株、海南文昌株、保亭 株、广西龙胜株为A型；越南Caonguen株虽与除元江株外的其它5 个地理株稍有差异但仍划归为A型。A、C两型差异明显(4．7～6．1％)， 型内差异(O～1．1％)明显小于型间差异，从而进一步确证以型间rDNA —ITS2区序列差异为基础的分子鉴别技术是判断微小按蚊复合体分 类地位的有效方法。 4．首次建立了应用限制性内切酶Sau96I对微小按蚊复合体rDNA— ITS2区PCR扩增片段作酶切的分型技术，结果同样显示元江株与其 区PCR扩增片段可对微小按蚊A、C型作明确区分，可简化微小按蚊 复合体的分类步骤，使微小按蚊遗传多态性研究方法更为简捷、经济、 可靠。 5．选取rDNA--ITS2区序列差异最大的元江株与思茅株、保亭株， 析可知思茅株和保亭株该区序列相同，元江株与前两者差异很小 微小按蚊复合体核糖体DNA内转录间隔2区序列差异分析及遗传多态性研究 中文摘要 (0．5～0．7％)，序列碱基变化仅包括4处颠换。初步说明应用16 作为分子标记在研究微小按蚊复合体分类方面的作用并不明显 关键词： 微小按蚊复合体； 核糖体DNA第二内转录间隔区 种群遗传多态性； 酶切分析 垡!：丝壑墨盒堡望塑竺型垒塑堑墨塑堕!垦壁型茎墨坌堑墨望堡兰查堡竺塞一一一●生!i!墨 OF O