心肌细胞培养液外抑瘤活性及其相关分子机制初步探讨.pdfVIP

目 录 1 心肌细胞培养液体外抑瘤活性及其相关分子机制初步探 讨………………………………………………………………1 1 . 1 中文摘要………………………………………………………1 1 . 2 英文摘要………………………………………………………4 1 . 3 前言……………………………………………………………7 1 . 4 材料与方法……………………………………………………16 1 . 5 结果……………………………………………………………26 1 . 6 讨论……………………………………………………………32 1 . 7 结论……………………………………………………………39 1 . 8 参考文献………………………………………………………40 1 . 9 英汉缩略词对照表……………………………………………44 2 致谢……………………………………………………………45 3 天然抑瘤物抗肿瘤作用机制的研究概况 （综述）…………46 2 心肌细胞培养液体外抑瘤活性及其相关分子机制初步探讨 摘 要 本课题组前期实验已证实了鼠心肌细胞培养液在体外具有抑制人鼻咽癌细 胞生长的活性，并具有时间依赖性，而对正常细胞鼠肾小球系膜细胞的生长则无 明显抑制效应，为此我们推测心肌细胞培养液中可能含有某种（些）抑瘤物质。 进一步研究发现其抑瘤机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞有关。为此本课 题组进行了体内实验研究，结果发现心肌细胞培养液能抑制CNE2 裸鼠移植瘤和 S180 小鼠移植瘤的生长，而对小鼠的正常生长无影响，从而证实了心肌源性抑瘤 物的有效性和安全性。 目的： 前期的体内外实验均表明鼠心肌细胞培养液（myocardial cells culture medium ，CMCM ）可抑制人鼻咽癌低分化鳞癌细胞系（CNE-2 ）的生长，其机 制可能与诱导细胞凋亡有关。本实验力图进一步研究CMCM 对多种肿瘤细胞生 长的抑制作用，充分证实CMCM 的抑瘤现象及其抑瘤活性的广谱性。并在本课 题组前期实验基础上初步探讨其引起肿瘤细胞发生凋亡的相关分子机制及其信 号通路，为探明心肌源性抑瘤物抑瘤机制提供更加充分的科学实验依据。 方法： 1.原代培养鼠心肌细胞，收集心肌细胞培养液（CMCM ）,超滤获得10KD 的CMCM 。 2.以顺铂（DDP ）作为阳性对照，DMEM 培养基作为阴性对照，用10KD 的 CMCM 干预培养人宫颈癌细胞Hela, 小鼠肺癌细胞Lewis, 正常大鼠肝细胞BRL 48 小时后，采用MTT 法检测细胞存活情况，计算细胞存活率。同时采用类似方 3 法检测 CMCM 不同时间点（24h,48h,72h ）对Hela 细胞存活率的影响,并绘制生 长曲线。 3.DMEM 培养基为阴性对照，用酶标仪检测CMCM 干预CNE-2 细胞48 小 时后的细胞内Caspase3, Caspase8 和Caspas9 酶活性。 4.采用基因芯片检测CMCM 干预CNE-2 细胞48 小时后的凋亡相关基因的表 达差异。 结果： 1. MTT 法检测发现48 小时的CMCM 组Lewis 细胞，Hela 细胞存活率分别 为64.69±15.86%，42.97 ±6.45%与阴性对照组（100.00±12.61%，100.00±12.87% ） 相比差异具有统计学意义 （P0.05 ），与顺铂组（60.51±12.20%，34.57 ±3.26% ） 相比，差异无统计学意义（P0.05 ）,而对于BRL 细胞，CMCM 组其存活率 （90.87±12.79% ）与阴性对照组（100.00±12.00% ）相比，差异则无统计学意义 （P0.05 ），与阳性对照组顺铂（59.65±9.17% ）相比，差异具有统计学意义 （P0.05 ）。 同样采用MTT 法检测CMCM 不同时间点对Hela 细胞增殖的影响。结果显 示24 小时时，48 小时时CMCM 组Hela 细胞存活率分别为65.75±4.30%，