应用pcr-c-rflp方法快速诊断女性生殖道感染的初步研究.pdfVIP

应用POR-OE—RFLP方法快速诊断女性 生殖道感染的初步研究 硕士研究生：李琳 指导教师：张卓然 教授 专业名称：病原生物学 摘 要 目的：细菌所致的生殖道感染是女性常见病、多发病，也是引发 女性恶性瓣瘤的原因之一，为了给临床提供快速、准确的诊治依据， 本课题利用分子生物学方法PCR-CE～RFLP，建立一种为临床女性生殖道 感染提供诊断的科学机制，逐步开发检测泌尿生殖道感染菌的基因芯 片，用于临床诊断。 方法：利用细菌16SrRNA高度保守序列合成一对细菌通用引物， 引物上游5’端用57一FAM标记。以8株已知菌株及。38例临床诊断为 生殖道炎症的女性生殖道分泌物为研究对象进行细菌培养，将培养物 进行PCR扩增，同时将生殖道分泌物适当处理后直接进行PCR扩增， 然后将两种扩增产物用内切酶HaeIII进行限制性酶切，酶切产物进行毛 LengthPolymorphism，RFLP)分析来鉴定不同病原菌。 结果：①已知菌株PCR扩增阳性率为75％6／8)、毛细管电泳阳 ltaelII完全酶切片段及不完全酶切片段的毛细管电泳结果，与电子克隆 产物的酶切片段基本～致。④用传统培养检测法在生殖道常见的致病 菌中，可检出有大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎 克雷伯菌和鲍曼不动杆菌，本实验用PCR—CE—RFLP法同样也检测出来。 ⑤本实验还发现数种传统培养法未检出的细菌(即未定菌)：⑥对直接 标本的检出完全酶切法检出率为43％(12／28)，高于不完全酶切检测率 32％(9／28)。 结论：PCR—CE—RFLP法比传统的细菌培养法具有快速、准确、灵敏 的优点，可用于临床标本的直接鉴定。 16SrRNA 关键词： PCR一毛细管电泳一限制性片断长度多态性 直接标本 ·2· of of Identification PreliminaryStudy Pathogenic Rapid onFeminineGenitalTractPCR—CE—RFLP Bacteria by Lin Postgratuate：Li Advisor：Zhuoran Zhangprofessor biology Major：pathogenic Abstract TractInfectionsfemininecaused objective：ReproductivefRTI)of by is bacteriacommonand disease，which pathogenic frequently-occurring to of order with i