猪伪狂犬病毒冀株gd基因的克隆、表达及检测.pdfVIP

摘要 本研究利用三种不同的方法提取猪伪狂犬病毒冀A株的核酸。并根据文献， 设计了一对特舅控号l物，利用PcR技术扩增出了PRv冀A株豹gD基毽。经琼 脂糖电泳检测，纯化目的片段与pucl8克隆载体连接，并转化至大肠杆菌JMl09 感受态细骢，送行蓝自掰筛选，得到转亿子经PcR鉴定鞠酶切分撰筛选出阳淫 克隆。结果表明，作者得到的阳性重组子(pucl．2)中含有gD燕因，表明是正 确插入，弗挺羯性壳隆餍粒送大连宝生物公司测序。经核替酸铡彦，该纂因全长 1197bp，含有一个开放阆读框，编码398个氨基酸，与国内外5株不同来源的海 秣逶行了}0较，发现冀A株gD基蠢存在13处点突变移一楚缺失突变，并发现 PRV 位A罾Pfo重复商变区。使用DlqAstaf软悻将冀A株gD基因核替酸序列与上述 源性在98．8％～99．7％之间。将筵A株gD纂因推昏的氨綦酸序列与上述5个毒 株PRvgD基因氨基酸序列进行比较，同源牲在77．9％~79．2％之间。可见不同 来源的PRV毒株gD基因在核赘酸水平上的阔源瞧较高，键在氨慕酸水平的同源 性则具有一定差异。并绘制了系统发商树，根据系统发育树分析，冀A株与闽A (Min．A)株表现出了明显的亲缘关系。 作者将正确的重组毙隆质粒pucl．2用E