猪源优良乳酸杆选育及其thya基因缺陷型菌株的筛选.pdf

摘要 乳酸杆菌作为人及动物肠道正常菌群的优势菌，有诸多的益生功能，选择它 作为表达载体系统研制乳酸杆菌口服疫苗，可以实现乳酸菌的益生功能与外源基 因特异性免疫的有效结合。已报道的乳酸杆菌的疫苗表达载体系统，大多是以抗 生素抗性作为外源基因稳定表达的压力，存在耐药性基因扩散的问题。因此，以 非抗生素抗性为标记和选择压力的系统的构建，已成为新的研究热点。 以非抗生素抗性为选择压力的染色体一质粒致死平衡系统，是以细菌的管家 基因缺陷菌株为受体菌，在质粒上插入同源或异源完整受体菌缺陷的基因，作为 外源基因表达载体稳定的选择性压力。ThyA基因是细菌的一种管家基因，以其 作为选择压力构建的非抗生素抗性表达载体在国内外的研究已较为成熟。 本实验从健康仔猪肠道黏膜上分离到3株乳酸杆菌，种属鉴定后初步认为其 L13)。生长曲线测定结果表明，L1、L13的生长速度明显高于L5。耐酸、耐胆盐 试验结果表明，酸对Ll生长的影响并不大，pH值超过2．5，菌株的存活基本不受 影响；pH值为1．5处理30min仍有一定的存活率。L13耐酸能力相对较差，只能耐 受pH3．5和4．5。L1比L13更能耐受商浓度胆盐，在0．1％胆盐条件下，两株菌4h后 布的存活率分别为70．00％和46．67％：