猪瘟病毒e2基在昆虫细胞杆状病毒中的表达.pdfVIP

摘要 猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的猪的高度接触性传染病，是猪最重要的传染病之一， 给世界并国养猪业带来了巨大的经济损失。 CSFV E2基因编码的E2蛋白为囊膜蚩向，由370个氨基酸残基组成，是CSFV主要保护性 抗原蛋白，能够诱导机体产生中和抗体。 本试验设计针对E2基因的特异性引物，通过～步法RT-PCR，以猪瘟兔化弱毒疫苗毒(HCLV) 总RNA为模板，扩增获得E2基因，将PCR产物克隆到pGEM—TEasy载体后测序。然后将该基 A载体中，构建重组转座载体后转化DHl0Bac感受态细胞，获得重组 因插入到pFast．BacHT Bacmid后转染sf9昆虫细胞，传毒3代，获得重组表达蛋白。测序结果证实成功克隆CSFVE2 E2基冈序列和氨基酸序列进行 基因，其核苷酸序列为1119bp，共编码373个氨基酸，与HCLV 比较，同源性均达到99．74％。经PCR及双酶切鉴定，目的基因正确插入pFast．BacHTA转座载 CSFV标准阳性血清识别。ELISA结果证实本试验获得的E2重组蛋白与CSFV标准阳性血清具有 较好的