猪白细胞介素2巴斯德毕赤酵母表达及活性测定.pdf

摘 要 【目的】白细胞介素2主要是由激活的T淋巴细胞产生的一类重要的细胞因子，具有激活 淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK)和自然杀伤细胞，刺激T辅助细胞和自然杀伤细胞产生细 胞因子和促进细胞因子的繁殖以及刺激T细胞在体外生长等功能，因此它是在免疫调节中 有重要作用。猪IL．2基因的成功克隆与活性的测定具有十分重要的意义。本研究旨在获得 具有生物学活性的重组猪白细胞介素2，为构建新型基因工程疫苗奠定基础。 【方法】以经刀豆球蛋白A(ConA)诱导的猪外周血淋巴细胞中提取的总RNA为模板，应用 R1二PcR等技术扩增和克隆猪白细胞介素2的全基因，亚克隆猪白细胞介素2成熟蛋白基因于 真核表达载体pPIc勖A上，构建重组真核表达载体，电转化巴斯德毕赤酵母x．33建立重组 猪白细胞介素2的酵母表达系统，并以MTT比色法测定表达产物的生物学活性。 【结果】以猪外周血淋巴细胞中提取的总RNA为模板，以RT．PcR技术扩增获得大小约 凝胶电泳、＆DR I和踟¨双酶切及测序鉴定，获得含猪白细胞介素2基因重组质粒pMDl8一 ■PoIL一2的阳性克隆菌。再以该重组质粒为模板，PCR扩增出猪白细胞介素2成熟蛋白的 基因片段，连接真核表达载体pPIC劢A并转化大肠杆菌DH5q感受态