猪瘟胶体金免疫析快速诊断方法的建立.pdf

摘要 本研究运用胶体金免疫层析技术，以建立一种快速、灵敏、特异的检测猪瘟病毒 的方法。 本试验用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫兔和鸡，制备抗猪瘟病毒免疫血清：对制备的免 疫血清采用辛酸一硫酸铵盐析法提纯；提纯前后的抗体分别用琼脂扩散试验和常规聚 丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测其效价和提纯效果，结果显示提纯前后抗体效价均 为l：16，从PAGE电泳可见，提纯后的抗体杂带少，主要为Y球蛋白。以柠檬酸三 钠还原氯金酸，制备胶体金颗粒，根据不同大小的胶体金颗粒在检测时所呈现颜色的 鲜艳程度，制备l5nm胶体会颗粒用来标记兔抗猪瘟病毒抗体。胶体金标记前，胶体 金标记抗体最适稳定量的测定结果为401ag／mL；对标记好的胶体金标记抗体采用低温 超速离心法进行纯化：将纯化后的胶体金标记抗体作不同倍数的稀释，吸附于玻璃纤 维制成试纸条，经试验胶体金标记抗体最适稀释倍数为1：2；鸡抗猪瘟病毒抗体和羊 试纸条检测猪瘟病毒时，lOmin左右显示结果。标记好的胶体金标记抗体采用A、B、 C三种稳定剂来做保存试验，结果显示：A配方保持胶体金标记抗体活性时问较长、 胶体金标记抗体吸附于玻璃纤维后释放较为完全，在4。C干燥器中保存4个月后效果 仍然很好。用本试验制备的试纸条、直接猪瘟荧光抗体试验和猪瘟特