临床专用生化分析仪分析技术精要.ppt

第七章 临床专用生化分析仪分析技术 教学要求和目标 掌握 各分析技术的基本原理和分析方法 熟悉 各分析技术仪的结构组成特点，仪器的维护保养，质量控制和临床应用 了解 各分析技术仪的分类 第一节 浊度自动化分析技术 一、浊度分析的基本原理 在一定条件下，可溶性抗原与抗体在液相中特异结合，形成有一定大小的抗原颗粒，使反应液出现浊度 当光线通过介质中的复合物颗粒时吸收、透射、散射和折射 通过测量透射光或散射光信号强弱被测物的量。 浊度分析方法的分类 检测器的位置及接收光信号的性质分 透射免疫浊度法（turbidimetry immunoassay 散射免疫浊度法（nephelometry immunoassay 测定方式分： 终点浊度法与速率浊度法 浊度形成原理分： 沉淀反应浊度法与胶乳凝集比浊（粒子增强免疫浊度法） 终点散射浊度法 检测反应终点与起始点之间信号变化的方法 速率散射浊度法 速率是指在单位时间内抗原抗体结合反应形成复合物的量。是在抗原与抗体反应的最高峰测定其复合物形成的量，该峰值的高低与抗原的量成正比。 粒子增强免疫浊度法 选择大小适中、均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗体；当遇到相应抗原时，则发生聚集。单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两个或更多胶乳颗粒凝聚时，透过光减少，光减少的程度与胶乳凝集量成正比。 灵敏感度较高。 二、浊度分析仪的分类和基本结构 自动生化分析仪 散射浊度分析仪 应用较为普遍的有固定时间散射分析仪、速率散射分析仪和双光路自动免疫浊度分析仪 自动散射浊度分析仪的组成 分析系统：用于加样、稀释、保温和测试等。 包括散射测浊仪、加液系统、试剂转盘、样品转盘、卡片阅读器等 计算机系统：用于输入病人数据、选择程序菜单、计算参考曲线和储存测试结果 散射浊度分析仪光路示意图 三、浊度分析仪的保养 常规保养 日保养 ①关机前冲洗管道，以防止管道阻塞 ②开机前应检查注射器，防止漏液 ③检查D、B、A、W液面高度 ④光路校正 周保养 ①更换流动比色杯和小磁棒 ②清洁探针的外部 ③检查蠕动泵和钳制阀控制着管路中液体的流动情况 月保养 ①更换注射器插杆顶端 ②空气过滤网冲洗 ③疏通标本和抗体探针的内部 半年保养 ①更换管道 ②机械润滑 四、浊度分析的质量控制 （一）抗原过剩校正 检测方法： ①连续监测抗原抗体反应曲线，呈现异常 ②追加抗体，浊度继续增大 ③标本两种稀释度测定，浓度高的浊度反而低 （二）减少伪浊度 伪浊度： 除待测抗原抗体复合物产生的浊度外，其它可引起透射光或散射光变化的浊度都称为伪浊度 减少伪浊度的方法： ?采用新鲜、合格标本 ?保持比色杯和稀释杯清洁 ?使用合格的抗体试剂 ?严格控制增浊剂的浓度 （三）选择合适的入射光波长 入射光波长的选择原则： 除了抗原抗体免疫复合物外，反应体系中的其他成分对入射光的干扰应为最小，因为其他成分吸收了部分入射光，透射比浊法测定结果将使抗原浓度偏高，而散射比浊法测定将使抗原浓度偏低。 （四）仪器校正 选择合适的校准品 校准曲线的绘制 校准曲线的形状取决于抗血清和促聚剂的浓度的选择，也与免疫浊度法类型、校正方法及校准品的质量有关。 多推荐5点或6点定标。 适当的数学方法进行曲线拟合 五、特定蛋白浊度分析的临床应用 特定蛋白临床常规项目 免疫功能监测 免疫球蛋白：IgG、IgM、IgA、 C3、C4 临床意义： IgG、IgA、IgM检测有助于了解机体抗感染能力，有助于疾病的正确诊断和有效治疗。 在免疫复合物疾病中，C3、 C4检测可以了解其消耗程度。 适应症： ①免疫力低，反复感染病人； ②自身免疫性疾病；②多发性骨髓瘤；④慢性肝病；⑤非何杰金氏淋巴瘤；⑥白血病；⑦良性单克隆免疫球蛋白病；⑧先天性或获得性低免疫球蛋白血症；⑨对白、球蛋白比例异常者的随访⑩术后感染、移植排斥反应 第二节 电解质自动化分析技术 一、电解质分析的原理和方法 离子选择性电极（ion selective electrodeelectrode，ISE）是一类用特殊敏感膜制成，对溶液中某种特定离子具有选择性响应的电化学传感器。 常用于测量离子的活度或浓度。 ISE基 本结构 通常由电极管、内电极、电极内充溶液和电极膜（或称敏感膜）四个部分组成。 电极电位产生 基于膜材料与溶液界面发生的离子交换反应 当电极置于溶液中时，由于离子交换和扩散作用，改变了二相中原有的电荷分布，因而形成双电层，其间产生一定的电位差即膜电位 ISE的电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系，即符合Nernst方程 3. 电极电位测量 ISE的E ISE 值不能直接测定 必须将ISE与参比电极共同浸入待测样品中组成一个原电池，通