实时荧光pcr测临床真菌方法的建立及其临床应用.pdf

实时荧光PCR检测临床真菌方法的建立及其临床应用 中文摘要 实时荧光PCR检测临床真菌方法的建立 及其临床应用 (中文摘要) 目的：建立临床病原真菌的实时荧光PCR检测方法，评价其检测临床标本真菌 感染的应用价值。 方法：酚一异硫酸氰胍法提取5例临床培养阳性病原真菌的DNA，利用与真菌 Chen 核糖体的18srDNA互补的一对通用引物，优化实验条件，建立sYBRI实时 荧光PCR检测病原真菌的方法，应用建立的提取真菌DNA和实时荧光PCR方法检 测了37例临床标本，通过对比传统鉴定方法，评价其检出真菌感染的有效性。 结果：通过酚一异硫酸氰胍法提取的病原真菌DNA在纯度和质量上都符合PCR 的实验要求，且整个提取过程经优化后在1小时内完成；建立的实时荧光PCR方法 扩增曲线形态良好，无非特异性扩增，标准曲线相关系数达到1．0，检测灵敏度达 到20pgDNA，5例临床培养阳性真菌菌株均能被检出，且念珠菌和丝状真菌具