短发夹rna对舌癌tca8113细胞生长增殖的影响.pdf

内 容 摘 要 为了探讨通过 RNA 干扰（RNA interference，RNAi）抑制端粒酶活性途径治疗口 腔肿瘤的可行性, 本课题选用人舌癌Tca 8113 细胞为实验对象。观察靶向人端粒酶 逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)的短发夹RNA（short hairpin RNA ，shRNA）转染人舌癌 Tca 8113 细胞后对细胞生长增殖的影响，RNA 干扰前后细胞端粒酶活性及细胞形态的变化。在方法学上根据RNA 干扰原理，利用 构建的表达 shRNA 的靶向hTERT mRNA 的真核表达质粒（shRNA1），非特异性的 shRNA 真核表达质粒（shRNA2），转染试剂（德国 metafectene）和正常培养液处理 细胞。24h 后在共聚焦显微镜下检测荧光表达情况； 24h、48h、72h 用MTT 法检测 细胞增殖活性； 48h 后行 HE 染色观察细胞形态、TRAP PCR-ELISA 检测细胞端粒酶 活性。结果显示质粒转染细胞 24h 后,质粒转染组可见大量表达绿色荧光的细胞, shRNA1 组出现大量悬浮的表达绿色荧光的圆形死亡细胞，贴壁细胞显著减少；ELISA 法显示 shRNA1 组