禽流感番鸭源毒致病性及其ha基因的研究.pdf

摘 要 2002年底，浙江、福建两省出现番鸭禽流感疫情，病禽表现出明显的神经症 状，脑组织有特征性灰白色坏死灶，与先前禽流感特征症状及病变有异。为研究 这数起新发生病例的病原特性，探明流感的进化趋势，我们进行了病毒HA基因 的分析以及病毒对实验动物致病性的研究。 将分离自脑炎病变型禽流感病死番鸭的四株H5NI亚型禽流感病毒LH株、zA 株、LSD株和LSM株分别接种于12日龄非免疫鸡胚，收取正常死亡胚尿囊液， 差速离心后超离浓缩病毒，获得大量高奢扛度高纯度的病毒液。提取病毒RNA后， 杆菌DH5a，克隆后阳性产物测序分析。结果显示，四病毒株HA核苷酸序列均为 增加和消失；四毒株受体结合位点的序列也与高致病性禽流感病毒参考毒株相同。 软件分析四毒株间的亲缘关系，其氨基酸同源性为96．1％～98．6％。将其与其它禽 流感病毒参考株和相似病毒进行氨基酸序列同源性比较发现，实验株与国内四株 鸭源禽流感病毒及HK97、GD96高度同源，有95．1％～986％的同源性，而与其它 H5亚型毒株同源性85．6％～94．3％；构建的基因进化树显示，四株病毒被分为两侧 枝，与国内另六株构成一个亚支，位于欧亚种系一支内，独立于其它北美分离株。 选取实验株中的两株(LH和LSD)作