生物技术制药要点.docVIP

生物技术制药复习重点 绪 论 一、生物技术制药 采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物 来生产所需的医药品二、生物技术药物 采用DNA重组技术、单克隆抗体技术或其它生物新技术研制的蛋白质 或核酸类药物 三、我国生物技术制药现状和发展前景 举例 α1b型干扰素为我国科学家首创新药，国内市场占有率已达60% 一、生物药物 生物技术药物与天然生化药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为生物药物 二、生物药物的特性 【简答1】 ①药理学特性 1治疗的针对性强 2药理活性高 3毒副作用小、营养价值高 4生理副作用时有发生 ②生产、制备中的特殊性 1.原料中的有效物质含量低 2.稳定性差 3.易腐败 4.注射用药有特殊要求 ③检验上的特殊性 由于生物药物具有生理功能，因此生物药物不仅要做普通的理化检验，更要进行相应的生物活性检验 三、生物药物的分类 （一）按药物的化学结构和化学特性分类 （1）氨基酸及其衍生物类药物 （2）多肽和蛋白质类药物 （二）按原料来源分类 （1）人体组织来源 疗效好、无副作用，但来源有限。人血液制品类、人胎盘制品类、人尿制品类 （2）动物组织来源 动物脏器，来源丰富、价格低廉、可以批量生产。但由于种属差异，要进行严格的药理毒理实验 （3）植物组织来源 中草药，酶、蛋白质、核酸 （4）微生物来源 抗生素、氨基酸、维生素、酶 （5）海洋生物来源 潜力很大，包括海洋动植物、微生物 （三）按生理功能和用途分类 （1）治疗药物 肿瘤、爱滋病、心脑血管疾病等（2）预防药物 传染性强的疾病，疫苗、菌苗、类毒素（3）诊断药物 速度快、灵敏度高、特异性强、免疫诊断、酶诊断、放射性诊断、基 因诊断试剂（4）其它 生化试剂、保健品、化妆品、食品、医用材料 四、生物药物的制备 生物药物原料的选择、预处理与保存方法 1原料选择原则 ①有效成分含量高②原料新鲜③原料来源丰富、易得④原料中杂质含量少⑤产地较近，成本低 2预处理与保存 预处理：除去非药用部分，做好保鲜处理 保鲜方法：①冷冻法，适用于所有生物原料，-40℃。②有机溶剂（如丙酮）脱水法，适用于原料少、价值高，有机溶剂对原料生物活性无影响。③防腐剂保鲜，常用乙醇、苯酚等，适用于液体原料，如发酵液、提取液。 生物药物的提取 （1）组织与细胞的破碎（2）提取 生物药物的分离纯化 第二章 基因工程制药 一、生物技术的核心是基因工程，基因工程技术最成功的成就是用于新型生物药物的研制。 二、利用基因工程技术生产药物的优点 1.可大量生产（过去难以获得的）生理活性蛋白和多肽，以保障临床供应 2.可提供足量的生理活性物质，以便进行深入研究，从而扩大这些物质的应用范围 3.可以发现、挖掘出更多的内源性生理活性物质 4.可通过基因工程和蛋白质工程技术对内源生理活性物质的不足之处进行改造和去除 5.可获得新型化合物，扩大药物筛选来源 三、基因工程技术 将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建成工程菌，实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术 四、制备基因工程药物的一般程序【简答】（重点） 1、目的基因的分离与克隆 2、构建DNA重组体 3、构建工程菌 4、目的基因的表达 5、外源基因表达产物的分离纯化 6、成品检定与包装 五、获得目的基因常用的方法有逆转录法和化学合成法 六、表达型载体：在cDNA插入位置的上游具有启动子序列，重组后插入的cDNA能够表达，并经转录和翻译合成相应蛋白质的载体 非表达型载体：在cDNA插入位置的上游无启动子序列，重组后插入的cDNA不能表达，不能经转录和翻译合成相应蛋白质的载体 人工接头：由人工合成的、连接在目的基因两端的含有某些限制酶切点的寡聚核苷酸片段。它能使目的基因产生粘性末端，从而与载体连接 基因表达 基因表达的微生物宿主细胞的分为原核细胞和真核细胞两类 原核细胞：如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌2.真核细胞：如酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞 掌握各自特点 原核细胞 （1）大肠杆菌特点：①产物多为胞内产物②真核蛋白质常以不溶性包含体的形式存在③蛋白质产物不能糖基化④目的蛋白的N-端常带有一个多余的Met残基，易引起免疫反应⑤有时会产生很难除去的内毒素⑥有时会产生蛋白酶破坏目的蛋白 （2）枯草芽孢杆菌特点：①分泌能力强，可将蛋白质产物直接分泌到培养液中②不形成包含体③不能使蛋白质产物糖基化④有很强的胞外蛋白酶，会对产物进行降解 （3）链霉菌主要特点：不致病、使用安全、分泌能力强、可将表达产物直接分泌到培养液中，具有糖基化能力 真核细胞 （1）酵母特点：①繁殖迅速②基因工程操作简单（可以廉