人教版生物选修一课题1《DNA的粗提取与鉴定》ppt课件1.pptVIP

课题1 DNA的粗提取与鉴定 * 1.DNA的释放：利用鸡血细胞在蒸馏水中渗透吸水过度导致细胞膜和细胞核膜的破裂，得到含有DNA的溶液。 2.析出DNA：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低； 3.提取DNA：DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精，利用此可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 5.鉴定DNA：DNA+二苯胺（沸水浴）→蓝色 一、实验原理 4.纯化DNA：DNA不被蛋白酶分解，DNA和蛋白质对高温的耐受性不同，利用此最大限度地将DNA与杂质分开。 二、方法与过程 1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得） 0.1g/mL柠檬酸钠100mL 活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。 2.提取DNA ①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。 ②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质（如蛋白质） ③原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌，机械加速血细胞破裂。 （1）提取血细胞核物质： （2）溶解核内的DNA： 滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。 （3）析出含DNA的粘稠物： （4）滤取含DNA的粘稠物： （5）DNA粘稠物的再溶解： 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。 用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。 20mL2mol/L的NaCl溶液 步骤⑷含DNA的粘稠物 在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。 （6）过滤含有DNA的NaCl溶液： 用放有两层纱布的漏斗过滤步骤（5）所得的溶液，滤液中含有DNA。 （7）提取含有杂质较少的DNA： 步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。 3.DNA的鉴定： 加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。 1.共有“三次过滤，两次析出” 2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精” 三、实验小结