esta、cba对htp--1细胞icam--1表达影响研究及肺炎链球菌快速诊断.pdfVIP

．里型堕堂堕堡主兰垡鲨茎 ．一—— 。———————————————————————————————————一一。 一__ 中文摘要 球菌快速诊断 目的： cpsA和spn9802两种引物基因定量检测肺炎链球菌检测方法。 方法： 1 分别将含酶切位点的眙删、CbpA扩增产物与含相同酶切位点的pMDl8T双酶 酶切鉴定后将pET28(a+)表达载体经与瓜棚、CbpA扩增产物相同的酶酶 酶切鉴定后转化至BL21。根据不同的温度和不同的IPTG浓度分别对含pET28 电泳进行分析，确定最佳诱导温度和IPTG浓度。根据诱导蛋白的HIS标签， 将目的蛋白经与HIS标签有亲合性的镍一琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化。根据 梯度纯化结果确定最佳纯化条件。纯化蛋白经SDS电泳进行分析，根 据电泳分析的结果将目的纯化蛋白液通过脱盐柱脱盐并经SDS电泳确 定。根据染料结合法，应用碧云天BCA试剂盒检测重组蛋白浓度。 2 上海细胞研究所购得人单核细胞白血病细胞THP一1，细胞培养至1×106经 PMA作用浓度