mapk信号通对肝癌多药耐药的影响研究.pdf

摘要 目的： 1．化疗药物诱导建立多株人肝癌多药耐药模型，鉴定其耐药性，比较亲本株 与耐药株生物学特点的差异。 2．检测人肝癌细胞亲本株及耐药株中SP细胞比例，探索耐药细胞与SP细胞 的联系。 3．检测人肝癌多药耐药细胞模型中MAPK表达情况，探索人肝癌细胞株中 MAPK信号通路与多药耐药的关系。 号通路与多药耐药的关系，以及MAPK在肝癌组织中的表达情况。 方法： 1．采用ADM对Hep 行大剂量冲击和小剂量缓升两种方法诱导。采用生物发光法及Mn法进行药敏 实验并计算耐药指数，免疫组化、RToPCR检测耐药基因及相关蛋白表达。免疫 组化法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡，Transwell检 测细胞体外侵袭能力，比较耐药株与亲本株的差异。 2．荧光显微镜计数淡染细胞，流式细胞仪分析、分选SP细胞，无血清培养 观察细胞生长特性，侵袭实验、划痕实验检测SP细胞在侵袭、迁移方面的能力。 3．RT．PCR和Westem JNKl、JNK2、P38ct等基因转录及表达。 4．制作组织芯片，免疫组化检测MDRl蛋白表达水平，石蜡包埋组织中提取 RNA，实时定量PCR检测MAPK细胞信号通路基因表达水