TGEVS1基因ETECLTB基因原核表达论文.doc

猪传染性胃肠炎病毒S蛋白A、D基因与猪大肠杆菌LTB基因的重组、克隆及原核表达 【摘要】 猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis of swine,TGE）是由冠状病毒科冠状病毒属的猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV）引起的一种以呕吐、脱水、严重腹泻为主要特征的急性、高度接触性传染病。产肠毒素型大肠杆菌（Enterotoxigenic E.coli,ETEC）是引起仔猪腹泻的一种重要的肠道病原菌,能够引起仔猪黄痢和仔猪白痢等。根据GenBank中公布的TGEV的S蛋白A、D基因序列和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（LTB）基因序列,分别设计1对引物,采用RT-PCR技术扩增含A、D位点的S1基因和LTB基因,各自将其插入pET-28a（+）载体中构建原核表达质粒,并进行PCR、酶切鉴定及序列测定。重组菌经诱导表达后,表达产物用SDS和Western-blot进行检测。RT-PCR扩增得到了S1基因片段,该基因全长980 bp,编码262个氨基酸,序列分析显示S1基因与GenBank中...?更多还原 【Abstract】 Transmissible gastroenteritis of swine （TGE） is an acute contagious disease which can lead to vomiting, dewatering and serious diarrhea. It caused by transmissible gastro-enteritis virus belonging to Coronaviridae Coronavirus genus（TGEV）. Enterotoxigenic E.coli （ETEC） is a important entero-pathogenic bacteria which can cause young pig diarrhea, young pig yellow dysentery and young pig white flux. According to the publication of GenBank TGEV protein S, A, D gene sequence and E.coli heat-labile en...?更多还原 【关键词】 TGEV； S1基因； ETEC； LTB基因； 克隆； 原核表达； 【Key words】 TGEV； S1 gene； ETEC； LTB gene； clone； prokaryotic expression； 摘要 4-5 Abstract 5-6 1 引言 11-26 1.1 猪传染性胃肠炎病毒 11-22 1.1.1 TGEV 的一般生物学特性 11-13 1.1.2 TGEV 分子生物学特性 13-17 1.1.3 TGEVS 蛋白在制备诊断制品上的研究进展 17-20 1.1.4 TGEVS 基因工程疫苗的研究进展 20-22 1.2 猪大肠杆菌 22-24 1.2.1 产肠毒素型大肠杆菌 22 1.2.2 肠毒素 22 1.2.3 热敏肠毒素及分子结构 22-24 1.2.4 LT 的佐剂活性 24 1.3 本课题研究的目的及意义 24-26 2 S_1 基因和LTB 基因的克隆、重组及序列分析 26-40 2.1 材料 26-29 2.1.1 菌株、毒株与细胞 26 2.1.2 载体及克隆菌株 26 2.1.3 细胞培养所需主要试剂 26 2.1.4 PCR(RT-PCR)反应所需试剂 26-27 2.1.5 目的基因的克隆所需试剂 27 2.1.6 试验所用溶液及其配制 27-28 2.1.7 主要仪器 28-29 2.2 方法 29-35 2.2.1 猪传染性胃肠炎S_1 基因克隆与序列测定 29-33 2.2.2 猪大肠杆菌LTB 基因克隆与序列测定 33-34 2.2.3 S_1 基因与猪大肠杆菌LTB 基因的重组 34-35 2.3 结果与分析 35-37 2.3.1 猪传染性胃肠炎S_1 基因克隆与序列测定 35-36 2.3.