应用免疫学方法pcr技术检测华支睾吸虫的研究.pdf

摘要 摘 要 【目的】1．建立敏感、特异的双抗夹心ELISA法，检测华支睾吸虫病人粪 样中的排泄分泌抗原(excreted-secretoryantigen，ESantigen)，用于测定人群中华 支睾吸虫的感染； 2．建立高特异、高灵敏的PCR方法，检测鱼肉中的华支睾 吸虫囊蚴DNA，应用于鱼类食品的卫生检疫及华支睾吸虫中间宿主的感染调查。 【方法】1．对17株华支睾吸虫单克隆抗体应用间接ELISA法确定其亚类， 并用位点阻断ELISA法，进行位点类别分类；2．采用单抗和单抗或单抗和多抗 之间的二二配对实验，以夹心ELISA法筛选最佳抗体组合；3．比较常规双抗夹 ES抗原的敏感性，确定粪ES抗原的ELISA检测系统；4．通过对两种粪ES抗原 抽提方法BSA法和PBS法的对比实验研究，确定最佳粪ES抗原的抽提方法；5． 通过检测纯化的ES抗原、模拟粪ES抗原、华支睾吸虫病人粪样和其他消化道寄 生虫病人粪样对建立的双抗夹心ELISA方法进行敏感性和特异性的初步评估：6． 行优化，确定最佳的PCR反应条件；7．通过检测华支睾吸虫囊蚴DNA和其他 性和特异