融合gp67信号肽慈菇蛋白酶抑制剂基因在蚕体内表达.pdfVIP

15 卷 3 期 生 　物 　工 　程 　学 　报 Vol. 15 No. 3 1999 年 7 月 Chinese Journal of Biotechnology J uly 　1999 融合 gp67 信号肽的慈菇蛋白酶抑制剂基因在蚕体内表达 1 1 1 1 2 季 　平 　肖庆利 　何家禄 　吕鸿声 　吴祥甫 1 ( 中国农业科学院蚕业研究所农业部家蚕生物技术重点开放实验室 　镇江 　212018) 2 ( 中国科学院上海生物化学研究所 　上海 　200031) ( ) 摘 　要 　用 AcMNPV 的 gp67 信号肽与慈菇蛋白酶抑制剂基因 A PI 2 融合 ,并整合到昆虫 病毒表达载体 BmBacPA K6 中 ,受多角体蛋白基因启动子控制 。慈菇蛋白酶抑制剂在蚕体 内成功地得到了高效表达 。比较了 gp67 信号肽和慈菇蛋白酶抑制剂信号肽在昆虫表达系统 中对表达产物的影响 ,发现表达产物都能分泌到血淋巴中 ,表达量很相似 ,但这两种信号肽在 表达过程中都没有被切除 ,且不同信号肽对表达产物的生物活性有很大影响 。 关键词 　家蚕核型多角体病毒 ,蛋白酶抑制剂 ,信号肽 ,家蚕幼虫 ( ) 分类号 　Q812 　　文献标识码 　A 　　文章编号 1999 细胞内合成的蛋白质释放到胞外机制是多样的 ,其中主要为信号肽引导蛋白质的分 泌 ,信号肽位于穿膜蛋白的N 末端 ,一般由20～30 个氨基酸组成 ,N 端 1～5 个氨基酸中 含 1 个或几个带正电荷的Lys 或 Arg , 引导新生肽链向膜转移 , 中央部分是由7～16 个氨 α 基酸组成的疏水区 ,能够形成一段 螺旋结构 ,C 端 4 ～6 个氨基酸是由少数亲水性氨基 酸组成的信号肽酶的切割位点 。信号肽能有效地引导新生肽穿越原核生物的质膜或真核 生物的内质网膜 。在大肠杆菌和酵母表达系统中有利用信号肽的成功实例 。但在昆虫表 达系统中信号肽的应用还处在探索阶段[1～3 ] 。我们 曾报道用含信号肽基因序列的慈菇 ( ) [4 ] 蛋白酶抑制剂 API 基因 A PI 4 ,在蚕体内成功地得到了高效表达 。但表达产物的分子 量比天然的API 大 ,推测 API 的信号肽未被切除。为了进一步证实信号肽是否被切除 , 病毒来源的 gp67 信号肽能否被正确识别加工 , 以及不同信号肽对表达产物的活性和分泌 效率是否有影响 ,进行了本次试验 。 1 　材料和方法 11 　材料 111 　质粒和菌株 : p KS 、pBacPA K8 、pUgp67S 由上海生物化学研究所保存 。pU gp67S 中含有可编码 38 个氨基酸的 AcMNPV 的 gp67 信号肽序列 。M13mp18API2 由 上海生物化学研究所戚正武教授馈赠 。A PI 2 基因克隆于 M13mp18 的 EcoRI Hin d Ⅲ位 ( ) 　　国家高技术研究发展计划项 目资助 No. 102110206 。 　通讯作者 。 现工作于苏州大学蚕桑学院。 　　　收稿 日期 ,修回日期 。 3 期 季 　平等 :融合 gp67 信号肽的慈菇蛋白酶抑制剂基因在蚕体内表达