与系统性红斑狼患者皮肤损害有关的血清抗体的研究.pdfVIP

鱼!：坐奎堂堡主兰垡笙奎 皇墨竺丝堑堡堡垒皇耋些壁堡童查茎塑坐塑垫堡塑婴壅 与系统性红斑狼疮患者皮肤损害有关的血清 抗体的研究 专 业：皮肤病与性病学 学位申请人：贾淑青 导 师：谭国珍副教授 中文摘要 一、研究背景和目的 系统性红斑狼疮(systemiclupus 功能异常、B淋巴细胞高度活化、抗核抗体等多种自身抗体大量产生为特征的自 身免疫性疾病，可导致多器官、多系统受累。皮肤损害是SLE最常见的临床表 现之一，往往是促成SLE患者就诊的首要原因，同时也是最有提示意义的临床 诊断依据。皮肤是系统性红斑狼疮最主要的受累器官，但其损伤的机理尚不清楚， 国内外相关研究还很薄弱。通过对系统性红斑狼疮肾脏损伤机制的研究，学者们 认为SLE靶器官的损伤主要是由抗原抗体反应介导的一种免疫性损害。鉴于此， 有学者探讨了目前已知的SLE系列自身抗体在皮损发生中的作用，结果未能明 确这些抗体是否参与了皮肤损害。因此，我们推测，在SLE患者血清中存在能 与皮肤蛋白结合的抗体，这种或这些抗体可能与已知的SLE系列自身抗体不同， 通过识别并与皮肤自身抗原结合，引起皮肤损伤。 为此，本课题拟从以下几个方面进行研究：观察SLE患者血清与表皮及全 层皮肤中提取的蛋白质结合情况；分析血清中能与皮肤蛋白结合的抗体的存在与 皮肤损害的关系；分析检测到的抗体与其他已知SLE系列自身抗体的关系；分 析检测到的抗体与SLE其他组织损伤的关系。 本课题探讨了与SLE患者皮肤损害有关的血清抗体，对于阐明系统性红斑 狼疮皮肤损害的发生机理具有重要意义。同时，对SLE进行早期诊断和治疗提 垒!坐奎堂堡主兰垡丝壅 兰墨竺丝竺塞翌鉴皇童些坠望童塑茎竺塾塑垫竺箜堕窒 供科学依据。 ’ 二、材料方法 1．研究对象 实验组入选的36例SLE患者均符合1997年修订的美国风湿学会的SLE诊 断标准。其中有皮损的31例，无皮损的5例；对照组包括正常人3例、大疱性 皮肤病患者3例、皮肌炎患者3例。 2．血清收集 抽取受试对象晨起空腹状态静脉血5ml，置于干燥管中，离心，3000r／min， 15min，吸取上层血清，分装，．80℃冰箱保存备用。 3．皮肤标本来源 所有皮肤标本均来自于我院泌尿外科手术室切除的正常包皮。 4．皮肤蛋白质提取 收集到的皮肤组织一部分直接提取全层皮肤的蛋白质，另一部分采用盐析 裂解的方法得到表皮，提取蛋白质。采用BCA法测定蛋白质浓度。 5．免疫印迹实验 制备SDS．PAGE凝胶，加入皮肤蛋白样品，以合适的电压，进行电泳，然 后电转，将蛋白质转移到PVDF膜上，用牛血清白蛋白封闭1小时，结合受试者 的血清1小时，结合二抗(辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体)l小时，最后显 色，观察结果。 6．统计分析 采用SPSSl3．0统计软件包分析实验数据。实验中定性资料的分析采用卡方 检验，定量资料的分析用t检验。显著性水准0．05。 三、结果 1．SLE患者血清抗体和皮肤蛋白结合情况 31例有皮损的SLE患者，血清中能与皮肤蛋白发生结合的有28例，未结 合的仅有3例；5例无皮损的SLE患者，血清中能与皮肤蛋白结合的有3例，未 能结合的有2例。 鱼!坐奎兰堡主兰壁垒奎 皇墨竺堡垒堑!鳖皇耋壅壁塑童塑签塑坚塑堕竺箜婴壅 SLE患者血清能识别的皮肤蛋白分子量从5kd到190kd不等，其中以识别 识别30kd蛋白的有19例，能识别23kd蛋白的有18例。 2．识别皮肤蛋白的抗体与目前已知SLE自身抗体的比较 将检测到的抗体与目前已知的SLE自身抗体进行统计学分析发现：识别 CP0．05)，识别23kd的抗体与抗ds-DNA抗体有关(pO．05)。 3．识别皮肤蛋白的抗体与其他临床表现的关系 检测到的抗体与SLE患者肾脏损害、关节症状和血液系统损害有关 (P．O．05)。 四、结论 1．SLE患