姜黄素诱导ho1表达增强人脐静脉血内皮祖细胞活力及抗氧化损伤能力的实验研究.pdfVIP

目 录 1 姜黄素诱导HO-1 表达增强内人脐静脉血皮祖细胞活 力及抗氧化损伤能力的实验研究………………………2 1.1 中文摘要………………………………………………………2 1.2 英文摘要………………………………………………………6 1.3 前言……………………………………………………………9 1.4 材料与方法……………………………………………………12 1.5 结果……………………………………………………………24 1.6 讨论……………………………………………………………35 1.7 结论……………………………………………………………45 1.8 参考文献………………………………………………………46 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………52 2 致谢……………………………………………………………53 HO-1 在血管内皮细胞中的作用研究进展（综述） 3 …………………………………………………………………54 2 姜黄素诱导HO-1 表达增强人脐静脉血内皮祖细胞活力及抗氧化 损伤能力的实验研究 摘 要 目的：体外分离、培养及鉴定人脐静脉血内皮祖细胞（EPCs ）。探讨姜黄 素(Curcumin, CMN)诱导EPCs 表达血红素氧合酶-1 (Heme Oxygenase-1 , HO-1)增强自身细胞活力及抗氧化损伤能力的作用及机制。方法：实验研 究分为四部分：1. 人脐静脉血EPCs 的分离、培养、鉴定：采用密度梯度 离心法分离、培养人脐静脉血EPCs ，通过倒置相差显微镜下观察EPCs 形 态学变化，免疫荧光法观察EPCs 吸收Dil-ac-LDL 和FITC-UAE-1 情况并 对7d 的EPCs 进行CD133 免疫荧光鉴定。2. CMN 的细胞毒性作用及诱导 EPCs 表达HO-1 的效果评价：将培养的EPCs 分为A 、B 、C 、D 四组，分 别以终浓度为0 、5、10、15µmol/L CMN 的培养基孵育24h ，CCK-8 检测 各组细胞增殖活力、比色法检测各组培养液中 LDH 活力，分析 CMN 对 EPCs 是否具有细胞毒性作用。Western blot 检测各组细胞HO-1 表达量，明 确CMN 诱导EPCs 表达HO- 1 的作用以及选择后续实验所需CMN 的最佳 浓度。3. CMN 诱导EPCs 表达HO-1 的细胞内信号转导机制研究：将培养 的EPCs 分为A 、B 、C 三组，分别在单纯培养基、终浓度15µmol/L CMN 的培养基、终浓度 15µmol/L CMN+1µmol/L 全反式视磺酸（ATRA ）的培 养基中孵育24h 。Western blot 检测各组细胞HO-1 表达量，探讨CMN 诱 导EPCs 表达HO-1 的信号机制。4. CMN 诱导EPCs 表达HO-1 增强自身 细胞活力及抗氧化损伤能力的作用及机制研究：将培养的EPCs 分为A 、B 、 3 C、D 四组，分别在单纯培养基、终浓度 15µmol/L CMN 的培养基、终浓 度 500µmol/L H O + 15µmol/L CMN 的培养基、终浓度 500µmol/L 2 2 H O + 15µmol/L CMN+ 10µmol/L 锌原卟啉（ZnPPIX ）的培养基中孵育24h 。 2 2 CCK-8 检测各组细胞活力、比色法检测各组培养液中 LDH 活力、ELISA 法检测各组培养液中的血管内皮生长因子(VEGF)和人碱性成纤维生长因 子（bFGF ）活力、AnnexinV-FTTC/PI 双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡 率。明确CMN 增强EPCs 活力及抗氧化损伤能力的作用及机制。结果