携带超抗原se基因的选择性增殖腺病毒治疗膀胱肿瘤的体外实验研究.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 目的 构建由hTERT和HIF双向启动子调控的携带SEA基因的选择性增殖腺病毒， 体外实验观察SEA基因在膀胱肿瘤细胞内的表达、刺激淋巴细胞相关细胞因子 的分泌功能及其联合杀伤肿瘤细胞的作用。 方法。 将端粒酶启动子(hTERT)和缺氧诱导因子启动子(HIF)分别酶切、连接在缺 启动子和SV40调控目的基因SEA表达及终止，骨架质粒和穿梭质粒脂质体共同 转染人胚肾293细胞进行同源重组获得双调控选择性复制性腺病毒H2-SEA-Ad， 获取阳性空斑，提取腺病毒的DNA，进行PCR鉴定。扩增病毒，氯化铯梯度离心 纯化腺病毒，测定病毒滴度。将以获取病毒转染膀胱肿瘤细胞m-J，RT-PCR检测 测定蛋白表达，显微镜下动态观测淋巴细胞与肿瘤细胞共培养，MTT检测活细胞 生长，ELISA检测IL-2、IL-4、TNF分泌。 结果 应用PCR验证、双酶切分析、序列测定表明，成功构建穿梭质粒 清晰条带；免疫荧光及Western-blot可见蛋白清晰表达；淋巴细胞与肿瘤细胞 共培养12、24、48h实验组肿瘤细胞明显少于对照组；MTT检测实验组在12、 于对照组。 结论 l携带SEA基因的选择性