socs-3基沉默对肥胖大鼠下丘脑insr mrna表达的影响.pdf

SOCS．3基因沉默对肥胖大鼠下丘脑 InsR mRNA表达的影响 硕士研究生：李 丹 指导教师：刘正娟 教授 专业名称：儿科学 摘 要 背景：儿童单纯性肥胖己呈逐年增加的趋势。肥胖症是心血管疾病、 高血压、2型糖尿病、慢性炎症和胆石症等疾病的重要危险因素，严重 威胁人类健康。研究发现肥胖者体内瘦素的水平与胰岛素水平明显高于 resistance)和胰岛素抵抗 正常人，说明肥胖者存在瘦素抵抗(1eptin (insulin resistance)【l】。胰岛素抵抗是指一定浓度的胰岛素没有达到预 期的生理效应，表现为外周组织尤其是肌肉、脂肪组织对葡萄糖的摄取 减少和抑制肝脏葡萄糖输出减少。胰岛素与瘦素(1eptin)具有同一信号 transduction factor，STAT)通路。细胞因子信号转 activatingtranscription of 导抑制因子3(suppressorscytokinesignaling 路的主要负性调节因子。SOCS．3可参与多种细胞因子的信号转导。大量 基础性研究结果表明肥胖动物模型存在血清胰岛素水平升高，胰岛素受 体(insulin 表达上调可能参与了胰岛素抵抗的形成。RNA干扰(RNA 物的基因功能和疾病治疗研究【21。因此，通过RNAi下调SOCS．3基因表 达有可能使InsR表达升高，可能对肥胖症的胰岛素抵抗有治疗作用。 目的：模拟儿童，以生后5周(相当于幼年期)的SD大鼠为实验 动物。通过RNA干扰技术建立SOCS．3表达下调模型，然后予以高脂饲 mRNA表达水平，探 料喂养，通过观察大鼠体重变化，检测下丘脑InsR mRNA的 讨RNA干扰(RNAi)引起的下丘脑SOCS．3表达下调对InsR 影响，从而对肥胖症的胰岛素抵抗是否有治疗作用。 方法：(本实验前期已提取下丘脑RNA，并采用放射免疫法测定了 胰岛素和C肽含量以及应用全自动生化分析仪检测了血糖含量)样品分 为2组： (1)RNAi+高脂饮食组(RNAi+high．fat 下丘脑注射SOCS．3lenti，高脂饲料喂养(含20％猪油)； diet， lenti+high-fat (2)controllenti+高脂饮食组(control lenti，高脂饲料喂养(含20％猪 Con+HFD)(n-8)，即下丘脑注射control 油)； 分别采用半定量lH．PCR(semi．quantitativeRT．vcR)(以p—actin为内对 照)和荧光定量PCR(fluorescentquantitativePCR)法(以GAPDH为内对照) 检测两组大鼠下丘脑内InsRmRNA表达。 结果： 差别具有极显著性意义(p0．01)。 组，两组间差别均有统计学意义(p0．05)。 mRNA 3．半定量RT．PCR法检测结果：RNAi+HFD组大鼠下丘脑InsR 表达(相对灰度值)明显高于Con+HFD组，两组间差别有统计学意义(p 0．01)。 mRNA 4．荧光定量PCR法检测结果：RNAi+