慢病毒eif4-shrna的构建及其感染hela细胞株的初步研究.pdf

l l 慢病毒eF4E-shRNA的构建及其感染He a细胞株的初步研究 摘要 interference RNA，siRNA)，构建人eIF4E基因短发夹RNA(shortRNA， hairpin shRNA)重组慢病毒质粒表达载体，并进行PCR和测序鉴定；利用重组成功的慢病毒 表达载体转染包装细胞293T，初步观察慢病毒颗粒对宫颈癌Hela细胞的感染情况， 为进一步研究该载体对目的基因eIF4E的沉默效果以及探索宫颈癌基因治疗的新方 法奠定基础。 方法设计并合成人eIF4E基因特异性干扰片段，连接到经双酶切线性化的PLVTHM载 体质粒，转化大肠杆菌(escherichiacoli，E．coli)TOPIO感受态细胞，筛选阳性 菌落，扩增后提取质粒，进行PCR和测序鉴定；将成功插入干扰片段的慢病毒质粒 In 染试剂