突变人cd59因在真核细胞中的表达活性研究.pdf

V6183S0 1 中文摘要 突变人CD59基因在真核细胞中的表达活性研究 病原生物学专业研究生 张丽 指 导 教 师 高美华教授 中文摘要 目的构建突变人CD59的真核表达系统，获得高效表达突变人CD59的CHO细胞株， 并进行糖化和非糖化突变人CD59蛋白功能的检测，探讨CD59作为补体攻膜复合体 抑制物在糖尿病血管并发症病理机制中的重要作用，为人类糖尿病血管增殖症的发 病机理提供依据。 方法突变人CD59的真核细胞表达系统的建立：将含有突变人CD59的重组PALTER —MAx质粒与PcDNA运用阳离子脂质体介导法共转染入CHO细胞；用新霉素类似物 (G418)筛选出阳性克隆，并用流式细胞术进一步筛选出高效表达克隆，建立稳定高 效表达CHO细胞株。应用免疫组化方法、免疫荧光技术进一步鉴定稳定高效表达CHO 细胞株；裂解细胞，应用sDs