聚乙二醇-磷酸纳米复合颗粒作为sirna载体的研究.pdfVIP

温州医学院硕士学位论文 聚乙二醇磷酸钙纳米颗粒作为silLNA载体的研究 【摘要】 目的 利用磷酸钙制备PEG．SS．siRNA／CaP纳米复合粒子，对该颗粒进行形态学观 察和粒径分析，并检测其siRNA包封率、血清稳定性和转染能力。 方法 1．采用化学偶联的方法，用双硫键把聚乙二醇和siRNA进行连接，得到PEG— SS—siENA偶联体(PEG—SS—siRNA 来调节CaP晶体的生长而获得PEG—SS-siRNA／CaP二元复合纳米颗粒。 2．利用紫外分光光度计来测量纳米复合颗粒离心后的上清液，通过结果计算获 得siRNA的包封率。 3．分别利用透射电镜(TEM)进行形态学观察和动态激光光散射(DLS)测量纳 米复合粒子的粒径和粒径分布。 4．利用DLS来检测纳米粒子在DTT溶液中的粒径以及在含有牛血清白(FBS)细 胞培养液中的稳定性。 5．利用荧光素活性分析对纳米粒子的转染效果进行评估。 结果 制备了PEG—SS—siRNA／CaP纳米复合颗粒，通过透射电子显微镜观察和动态 光散射测试，结果显示该纳米颗粒为结构紧密的规则球形，粒径分布范围较窄， 平均粒径为94nm，多分散指数0．012。动态光散射结果还显示在还原性环境中， 该纳米粒子粒径明显增加；在含有胎牛血清(FBS)的细胞培养液中，纳米粒子 的粒径在6小时内基本不发生变化，大约6小时后开始增加，显示了较好的稳定 性。通过与对照组的比较，荧光素活性分析结果显示出聚乙二醇一磷酸钙纳米复 合颗粒对于siRNA具有较好的转染效率。 结论 聚乙二醇磷酸钙纳米颗粒制备简单，所得到的纳米颗粒粒径小分布窄，生物 相容好，能有效载送并智能地在细胞内释放siRNA。虽然还有很多特性有待探索 和深入研究，此新型siRNA载体或将在基因载体的选择中占有重要的地位。 【关键词】 磷酸钙纳米颗粒；siRNA；聚乙二醇 as Calcium Nanocomposites PEGylatedPhosphate forsiRNA Carriers Delivery [Abstract] obiective siRNA containing ofPEG-calciumnanocomposites Synthesis phosphate observationofthe gene；morphological resultingnanoparticles ericod啦luciferase of ofthe siRNA； size loadingefficiency 觚dp舐icle measurement；determination in of incellculture release vitro；evaluationstability controlled s吡dvof ability of andinbuffer r