组织块培养法体诱导人脂肪干细胞向神经样细胞转化的实验研究.pdfVIP

组织块培养法体外诱导人脂肪干细胞向神经样细胞转化的 实验研究 中文摘要 【目的】 探讨组织块培养法分离的人脂肪源性干细胞的基本生物学特性、表面抗原 特点及其向成骨细胞、成脂细胞和神经样细胞诱导分化潜能，分析人脂肪源性 干细胞诱导分化的神经样细胞是否具有干细胞的特性。 【方法】 1．取健康人腹部皮下脂肪组织，组织块培养法分离出脂肪源性干细胞，进行体 外培养，观察其形态特征。 2．流式细胞仪检测3代脂肪干细胞表面抗原和向神经元诱导后细胞表面抗原。 3．取第3代人脂肪干细胞，分别用成骨和成脂诱导培养液诱导其向成骨细胞和 成脂肪细胞分化，冯库萨 VonKossa 染色、茜素红染色和油红O染色定性 鉴定其向成骨和成脂方向转化。 4．取第3代人脂肪干细胞，在神经细胞诱导培养液下诱导人脂肪干细胞向神经 样细胞定向分化。检测神经元特异性标志物尼氏体、神经元特异性烯醇化酶 NSE 和神经丝蛋白质200 NF200 表达情况，并绘制细胞增殖曲线。 【结果】 1．形态特征：原代及传代的人脂肪干细胞形态均类似成纤维细胞，生长能力旺 盛。 表达阳性，CD34、CD45、CDl06表达阴性。 3．表面抗原：向神经元诱导后细胞表面抗原表达：CD44高水平表达为 86．36％， 45．08％、2．66％。 4．第3代人脂肪干细胞经成脂诱导和成骨诱导培养，油红O染色、茜素红染色 和Von Ko