脱落乳牙干细胞向分化相关分子runx2动态表达研究.pdf

天津医科大学硕士研究生论文 中文摘要 目的： 体外分离、培养人脱落乳牙干细胞(SHEDs)，分析其生物学特征，探讨 SHEDs骨向分化潜能，分不同时间点观察成骨相关转录因子Runx2的动态表达 规律，为研究SHEDs成骨调控因素及其组织再生临床应用提供研究基础。 方法： 依据Miura等的实验方法，选取6~10岁健康儿童因滞留拔除的乳牙，采用 酶消化法分离、有限稀释法纯化，获得人脱落乳牙干细胞。观察原代和传代细 胞生长、增殖情况，测定细胞克隆形成率，HE染色，观察原代及传代细胞形态 学特征。流式细胞仪及细胞免疫荧光染色检测SHEDs表面标志。培养的第3代 SHEDs，在体外经含有IBMX、胰岛素、消炎痛和氢化可的松条件培养液，向脂 肪组织进行诱导分化，观察细胞形态变化及细胞内形成脂滴情况，4周后油红．O 染色：第3代SHEDs，在含有10％胎牛血清、l×10{mol／1地塞米松、50 mg／lP． 甘油磷酸钠和10retool／1维生素C的成骨诱导条件培养液诱导3周，观察细胞形 态和生长规律的变化，分别于成骨诱导第0天和第2l天做茜素红染色，检测矿