BiP调控IRE1a启动子转录活性及其蛋白表达的效应.pdfVIP

HEREDITAS (Beijing) 2013 3 , 35(3): 343―351 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2013.00343 BiP 调控IRE1α启动子转录活性及蛋白表达的效应 周菁华, 韩晓凤, 刘艳娜, 张鹏, 郭风劲 , , 400016 正常条件下, 外分泌或者跨膜的蛋白需要在内质网中完成正确的折叠。在营养缺乏、分化或其他应激状 态下, 内质网中的蛋白质会发生错误折叠并不断积聚, 形成内质网应激(Endoplasmic reticulum stress), 引发未 折叠蛋白反应(Unfolded protein response) 。内质网应激条件下, 内质网腔中的分子伴侣结合免疫球蛋白 BiP(Binding immunoglobulin protein) 与需肌醇酶IRE1α(Inositol-requiring kinase 1)解离并与未折叠蛋白结合从而 帮助蛋白形成正确结构; 同时未折叠蛋白通过与跨膜蛋白IRE1α直接结合活化其内切核糖核酸酶结构域, 活化 的IRE1α 能够剪切Xbp1 的mRNA 使其形成有活性的转录因子, 进而起始分子伴侣与未折叠蛋白反应相关蛋白 的表达, 使细胞脱离内质网应激状态。文章克隆了IRE1α 的启动子, 用荧光素酶报告基因法检测到BiP 能够上调 IRE1α 的启动子活性。通过构建 IRE1α启动子一系列截短体的报告基因载体, 确定了 IRE1α启动子活性的核心 区域; 进一步通过逆转录PCR 和免疫印迹在mRNA 水平和蛋白水平分别检测BiP 对IRE1α启动子的调控作用。 结果发现在内质网应激条件下, 分子伴侣BiP 通过上调IRE1α启动子转录活性, 增加 IRE1α 的表达, 进而提高细 胞处理内质网应激时未折叠蛋白的能力, 为揭示内质网应激条件下BiP 调控IRE1α转录调控机制提供理论依据, 同时为阐明ER stress 各信号分子之间的作用机制奠定实验基础。 BiP; IRE1α; 内质网应激; 未折叠蛋白反应 The effect on BiP regulation of IRE1α promoter transcription activ- ity and protein expression ZHOU Jing-Hua, HAN Xiao-Feng, LIU Yan-Na, ZHANG Peng, GUO Feng-Jin Department of Cell Biology and Genetics, Core Facility of Development Biology, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China Abstract: Usually, secreted or transmembrane proteins complete their three-dimension folding within endoplasmic re- ticulum (ER). Under the conditions of nutrient depletion, cell differentiation, or other stress statuses, misfolded or unfolded proteins aggregate within ER, and consequently cause ER stress and Unfolded Protein Response (UPR). In response to ER stress, BiP (Binding immunoglobulin protein) dissociates with IRE1α (Inositol-requiring kinase 1) and binds to unfolded 收稿日期: 2012−08−27; 修回日期: 2012− 11−26 基金项目: (, (2011-65)