m2型丙酮酸激在人甲状腺癌细胞增殖过程中的作用.pdf

llUl ㈣删㈣㈣II Y1 7690§’8 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………l 英文论著摘要……………………………………………………………………3 二、英文缩略语…………………………………………………………………………6 三、论文 —1L—j一 日¨舀………………………………………………………………………………7 实验材料和方法…………………………………………………………………8 实验结果…………………………………………………………………………15 讨论………………………………………………………………………………19 结论……．．：………………………………………………………………………20 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………22 五、参考文献…………………………………………………………………………23 六、附录 综述………………………………………………………………………………25 在学期间科研成绩………………………………………………………………34 致谢………………………………………………………………………………35 个人简历…………………………………………………………………………36 ·中文论著摘要· M2型丙酮酸激酶在人甲状腺癌细胞增殖 过程中的作用 目 的 本研究首次检测人甲状腺癌细胞中PKM2的表达，应用RNA干扰技术抑制 人甲状腺癌细胞内源性PKM2的表达，以探讨PKM2在甲状腺癌细胞生长过程中 的作用。 材料与方法 一、实验材料 1、研究对象 实验选用人乳头状甲状腺癌细胞株IHH-4与BCPAP、人甲状腺未分化癌细胞株 3．1。 人正常甲状腺滤泡上皮细胞株Nthy-ori 2、实验试剂 PKM2兔抗人多克隆抗体，FITC标记山羊抗兔抗体，real．timePCR试剂盒，SP 免疫组化染色试剂盒，SDS．PAGE凝胶制备试剂盒，BCA蛋白浓度测定试剂盒， HD转染试剂，DMSO、M丌、 pPKM2-U6一siRNA／Neo质粒及阴性对照质粒，Fugene PI试剂等。 二、实验方法 应用real．timePCR、Western印迹和免疫荧光方法来检测人甲状腺癌、人正常 法检测RNA干扰后甲癌细胞增殖能力的变化。 三、统计学分析 应用SPSSl7．0软件进行统计分析。计量资料采用均数士标准差(xis)表示；两 组均数比较时用独立样本t检验，双侧P0．05为差异有统计学意义。计数资料采 用#检验，双侧P0．05为差异有统计学意义。 实验结果 l、real．time PCR甲状腺癌细胞株PKM2高表达，real．time PCR少量表达， PKM2mRNA表达量约为正常甲状腺细胞的4．12．7．32倍。 腺滤泡上皮细胞株几乎无表达。 3、细胞免疫荧光实验中，PKM2在甲状腺乳头状癌细胞BCPAP、甲状腺未 分化癌8505C与甲状腺滤泡样癌FTC．133细胞胞浆中呈均匀弥漫分布。在正常甲 3．1胞浆中未显色。 状腺滤泡上皮细胞Nthy-