plga-ha合支架与异体骨体外细胞相容性的对比实验研究.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………3 二、英文缩略语…………………………………………………………………………5 盲行言………………………………………………………………………………6 日U舌……………………………………………………………………………… 材料与方法………………………………………………………………………6 结果………………………………………………………………………………8 讨论………………………………………………………………………………12 结论………………………………………………………………………………13 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………14 五、参考文献…………………………………………………………………………15 六、附录 综j苤……………………………………………………………………………17 致谢……………………………………………………………………………23 个人简介………………………………………………………………………24 ·中文论著摘要· PLGA．HA复合支架与异体骨体外细胞相容性的 对比实验研究 实验目的 研究新型多孔聚乳酸乙醇酸／羟基磷灰石(PLGA／HA)支架材料的体外细胞相 容性。采用贴壁法对兔骨髓基质细胞(BMSCs)进行体外矿化诱导培养，扩增后与 实验组(含10％HA的PLGA／HA)，对照组(异体骨)分别进行体外复合培养；并通过 定性及定量法检测BMSCs在材料表面的粘附能力、增殖活力，验证细胞材料复合 体的成骨活性。比较分析两组之间的差异。结果显示兔BMSCs在PLGA／HA及异 体骨材料的表面均能生长，经体外诱导后可形成钙结节，PLGA／HA组细胞的粘附 及增殖能力不弱于异体骨组，两组之间无统计学差异。 实验材料与方法 抽取3只新西兰大耳白兔骨髓间充干细胞，经体外分离、培养、扩增、传代， 并纯化骨髓间充质干细胞。取经诱导培养的第3代兔BM．SCs，消化后使细胞浓 度为lxl06／ml。用移液器吸取细胞悬液，分别接种在支架材料与异体骨上，直至 饱和。将培养板置于5％C02培养箱内孵育4h后，按上述方法再接种一次每块材 料上接种细胞约1x105，然后加入诱导培养液浸没材料，置于5％C02培养箱内。 隔天换液。在倒置相差显微镜下，逐日观察原代和传代细胞形态及粘附增殖情况。 于接种后4h，分别取每种材料各2个样本细胞计数板计算贴壁细胞数[细胞粘附 率(％)=贴壁细胞数／接种细胞数×100％】。分别于接种后第3、7天，取出每种材料 各2样本，细胞计数板进行计数，各组取平均值，比较各组细胞增殖情况。分别 line 于联合培养后第7天与14天，选择每种材料各2个孔，进行碱性磷酸酶(alka 液中，抽滤除菌。于联合培养14d后，弃原培养液，加入上述液体继续培养，24 h后在荧光显微镜下观察钙结节形成情况。 统计学处理，对细胞粘附率及ALP活性的定量进行处理，并进行数据分析。 实验结果 1细胞体外培养的观察BMSCc原代培养约5d后贴壁生长，逐渐形成克隆， 红细胞通过换液去除，10～12d汇合，前两代生长迅速，细胞呈成纤维细胞型，多 为梭形和不规则三角形，细胞排列呈漩涡状、放射状。 2细胞粘附率的测定接种4h后，每组材料的细胞粘附率：PLGA／HA组为 33％：异体骨组为31％ 3细胞增殖的情况接种后第3、7天，细胞计数见图1。PLG～，HA与异体 骨组比较差异无统计学意义；(p0．1) 4 ALP活性的定量检测见表1接种培养第7，14天，PLGA／HA组与异体 骨组比较差异有无显著意义(pO．1) 5钙结节的检测复合培养两周后，两组均可见明显的钙结节形成，并随时 间的延长而增大，四环素染色后出绿色荧光(图2) ；日