人乳腺癌细胞株oll样受体表达及sirna沉默toll样受体4的实验研究.pdfVIP

人乳腺癌细胞株Toll样受体表达及siRNA沉默Toll样受体4的实验研究 中文摘要 人乳腺癌细胞株Toll样受体表达及 siRNA沉默Toll样受体4的实验研究 中文摘要 表达情况及表达差异，探讨表达差异的意义。选择表达差异最显著的TLR4为靶基因， mRNA和蛋白表达差异、细胞增殖、凋亡和细胞炎症因子分泌等生物学功能的改变， 以探讨TLR4在乳腺癌发生发展中的生物学作用，为TLR4作为乳腺癌基因治疗的靶 点奠定实验基础。 方法：(1)培养人乳腺癌细胞株MDA．MB．23 时荧光定量PCR方法检测两细胞株TLRsmRNA表达情况，采用流式细胞技术和细 胞免疫荧光技术检测TLRs蛋白表达情况，研究TLRs在两种乳腺癌细胞株的表达情 况及表达差异。(2)根据TLR4mRNA序列，构建真核表达载体 MDA．MB．23 实时荧光定量PCR技术检测转染后TLR4mRNA变化。(4)采用流式细胞技术检测 细胞生物学功能的改变，细胞免疫荧光技术检测TLR4蛋白表达，DAPI染色细胞凋 亡情况，MTT检测细胞增殖能力的改变，流式细胞技术检测细胞因子(IL．6、IL．8) 分泌的改变。 TLRs(T