热休克肾癌细胞融瘤苗特异性杀伤效应的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 热休克肾癌细胞冻融瘤苗特异性杀伤效应的研究 目 的 研究热处理肾癌细胞后制备的冻融抗原负载树突状细胞(DC)体外诱导、活 化细胞毒性T细胞(CTI。)特异性杀伤。肾癌细胞的效应及其机制，为晚期肾癌的治 疗提供一种简便有效的新途径。 方法 1、肾癌细胞的体外培养 786-0。肾癌细胞株常规传代培养，收集对数生长期细胞以备实验。 2、树突状细胞的培养、形态学鉴定及免疫标志检测 (1)利用密度梯度离心法从健康人外周血中分离出单个核细胞(PBMC)，短 (2)热应激和反复冻融786—0肾癌细胞制备热休克肿瘤细胞冻融抗原，在第6天 加入至培养瓶中得到的DC记为HSAg—DC组；反复冻融786—0肾癌细胞制备单纯肿 瘤细胞冻融抗原，在第6天加入至培养瓶中得到的DC记为Ag—DC组；在第6天只 天应用光镜对DC进行形态学鉴定；DC培养的第3-4天、第7-8天应用扫描电镜 组和Ag—DC组CDla、CD83、CD80、CD86、四种表面分子的阳性表达率。 3、T淋巴细胞的培养及混合淋巴细胞反应 (1)将PBMC短暂培养后的悬浮细胞通过尼龙毛柱法获得T淋巴细胞，加入 non—DC—CTL组。 4、细胞毒实验及CTL杀伤活性测定 应用MTT法测定各反应孔的吸光值，通过公式计算出3组CTL对肾癌细胞的杀伤 率。 镗 里 三口 禾 1、DC的形态学鉴定 电镜观察结果显示，加入TNF-Q和肿瘤抗原后DC体积变大，表面粗糙，突起更 加明显，呈典型的树突状，具有成熟DC的特征。 2、DC表面标志的检测 的表达差异有显著性意义(PO．05)。 3、CTL对肾癌细胞的杀伤效应检测 各组DC诱导产生的CTL均对肾癌细胞产生杀伤作用，各组杀伤率随效靶比的 non—DC—CTL组最弱，经统计学分析，各组间杀伤率的差异均有显著性意义(P O．05)。 结论 (1)光镜、电镜观察及FCM分析结果表明联合应用TNF-a和肾癌抗原可诱 导DC成熟。 (2)DC表面标志检测结果提示热处理肾癌细胞制备的冻融抗原负载DC后可 以明显增强DC的抗原递呈能力。 (3)MTT法检测CTL杀伤活性结果显示热处理肾癌细胞制备的冻融抗原负载 DC后能诱导强大杀伤力的肿瘤特异性CTL。 (4)本研究提示，热休克。肾癌冻融抗原负载的DC瘤苗具有强大的抗肿瘤免疫 2 效应，可以为晚期。肾癌的治疗提供一种简便有效的新途径。 关键词 树突状细胞；肾癌；免疫治疗 3 ·英文文论著摘要· The oftumourvaccine cytotoxicity prepared specific ofheat．．shockedrenaltumorcells ective Obj To the andmechanismof T studyspecificcytotoxicity cytotoxic in inducedandactivateddendriticcells with vitro by loadingfreeze-thrawingantigen fromheat—shockedrenaltumor itwill ane