热缺血时间对无跳供体大鼠胰岛获取和功能影响的实验研究.pdf

·中文论著摘要· 热缺血时间对无心跳供体大鼠胰岛获取和功能影响的 实验研究 目 的 胰岛移植发展前景良好，但仍面临着需要供胰量大、存活率较低，自身免 疫性疾病复发所致移植物失功等问题。众多因素影响胰岛移植效果中，胰腺的缺 血时间一直被认为是最重要的因素之一。大鼠与人的胰岛在许多方面有着共同特 点随着胰腺移植例数的逐年增加，无心跳供体(non—heart-beatingdonor,NHBD)器官 的利用成为热点问题，NHBD供胰不可避免地经历了一段热缺血损伤【l】，探讨供胰 热缺血损伤安全时限及其与术后移植物功能状态的关系有重要意义。然而，到目 前为止对供胰耐受热缺血时限仍缺乏定论【2】，日本学者认为热缺血的安全时限30 分钟；美国学者则认茭J15分钟‘31。本实验旨在观察不同热缺血时间对大鼠胰岛分离 纯化结果的影响，为临床胰岛移植供者的选择提供依据。 材料与方法 1、实验动物及分组 本实验采用雄性Wistar大鼠(中国医科大学实验动物中心提供)，体重250～ 3009。大鼠秤重后，腹腔注射麻醉。腹部正中切口进腹。剪开膈肌，用血管钳夹 闭心脏基底部致使心脏停搏，阻断胸主动脉，造成无心跳供体(NHBD)的热缺血模 型。根据热缺血时间的不同将大鼠随机分为4组，每组10只。在大鼠心跳停搏后， 第1组至第4组大鼠，分别为0分钟、15分钟、30分钟、45分钟予以4。CUW液保存 8h，再将10ml胶原酶溶液注入胰腺。 2、胰岛的获取 用UW液原位灌注大鼠胰腺后切取并放置于UW液中低温保存。向大鼠胰管 rain。 内逆行灌注胶原酶溶液使胰腺充分膨胀，放在371l℃水浴中振荡消化12．15 终止消化后，两次离心洗涤，经80目不锈钢筛过滤，Ficoll梯度离心法纯化胰岛， 1％ 浓度分别为25％，23％，20．5％和11％，从23％和20．5％之间交界处及20．5％和1 之间交界处吸取胰岛、。 3、观察指标 获取的胰岛用双硫踪(DTZ)染色来计算分离胰岛数目并判断所提胰岛的纯 度，丫吮橙／澳乙陡(AO／EB)荧光染色法显示胰岛细胞活率，体外葡萄糖刺激下胰 岛素释放试验及兔抗鼠胰岛素抗体免疫组织化学染色检测胰岛活性。 4、统计学分析 将所得数据用均值士标准差表示，采取方差分析q检验，P0．05认为有统计 学意义，所有数据用SPSSll．5软件处理。 结 果 NHBD大鼠热缺血时间在30分钟以内各组获得胰岛的数量、纯度、活率及活 胰岛的数量、纯度、活率及活性与0分钟组相比有明显差别(P0．05)，低于临床 上的胰岛移植标准(活性75％，纯度50％)。 二口结 论，匕 l、热缺血时间在15分钟以内，对NHBD大鼠胰岛分离纯化无影响。 2、热缺血时间在15到30分钟内，对NHBD大鼠胰岛分离纯化无明显影响， 可用于胰岛移植。 3、热缺血时间超过30分钟，对NHBD大鼠胰岛分离纯化可产生明显影响， 不宜用于胰岛移植。 关键词 大鼠；胰岛细胞；热缺血时间 2 ·英文论著摘要· ofwarmischemiatimetotheisletfunctionon Effect the donorrat non—-heart-—beating Preface Good forthe ofislet isstillfacedwith prospectsdevelopmen