sarna介导trpv5表达在预防含钙尿路结石中的作用研究.pdfVIP

广州医科大学硕士学位论文 saRNA 介导的 TRPV5 表达对 HK2 细胞钙离子转运的作用研究 4. 在不同浓度和不同时间下使用二氢睾酮处理 HK2 细胞，并使用 Western Blot 检测其对 TRPV5 表达的影响。 5. 使用 Fura-2 钙离子荧光探针检测 HK2 细胞小激活 RNA 、二氢睾酮以及二者 共处理下细胞钙离子转运水平变化。 结果 1. 在设计合成的 3 个靶向 TRPV5 基因启动子的 dsRNA 中 ds-2939 有效上调了 HK2 细胞 TRPV5 的 mRNA 水平和蛋白质表达水平。免疫荧光结果显示 ds-2939 显著增加了 TRPV5 在 HK2 细胞的膜丰度。 2. ds-2939 对 TRPV5 表达水平的激活作用在 1 天至 6 天和 5nM 至 80nM 具有时 间和浓度依从性。 3. ds-2939 在 TRPV5 基础表达量较低的 PC3 和 HK2 细胞中激活效果明显。在 靶基因基础表达量较高的 HEK293 细胞中未能观察到激活效果。 4. 二氢睾酮在 12 至48 小时和5nM 至20nM 依从时间和浓度对HK2 细胞TRPV5 表达水平产生抑制作用。 5. 与对照组相比，ds-2939 可有效增加 HK2 细胞钙离子转运水平。二氢睾酮可 抑制 HK2 细胞钙离子转运水平。ds-2939 可部分逆转二氢睾酮对 HK2 细胞钙 离子转运水平的抑制效应。 结论 靶向基因启动子区域的小激活 RNA 可以用于上调 TRPV5 表达水平，并可激 活细胞钙离子转运。同时可部分逆转二氢睾酮对 HK2 细胞钙离子转运水平的抑 制效应。该技术有望成为预防泌尿系含钙结石发生及复发的新方法。 关键词 TRPV5 ；RNA 激活；泌尿系含钙结石；钙转运 论文类型 应用基础 万方数据 广州医科大学硕士学位论文 saRNA 介导的 TRPV5 表达对 HK2 细胞钙离子转运的作用研究 Abstract The Role of TRPV5 expression induced by saRNA in the prevention of urinary calcium stone Hypercalcinuria appears to be one of the risk factors of urinary calcium stone. TRPV5, a high selective calcium transporter, which is mainly found on the apical membrane side of the distal renal tubule, is responsible to the active calcium reabsorption and is revealed to be the rate-limiting step. TRPV5 knock out mice demonstrate significant hypercalcinuria. Former study showed the low expression of TRPV5 in the kidney of calcium oxalate stone model rats, hereditary hypercalcinuria rats and patients bearing urinary calcium stone. Hence, TRPV5 may become the target for the prevention of renal calcium stone.