第二章沉淀法精要.pptVIP

第二章 沉淀法 第一节 基本原理与沉淀类型 第二节 应用实例 第一节 基本原理与沉淀类型 一、基本原理 二、制备蛋白质 三、制备核酸 一、基本原理 根据各种物质结构不同，改变溶质的性质，致使抽提液有效成分溶解度变化。 沉淀（precipitation）：在溶液中加入沉淀剂使溶质的溶解度降低，形成固相从溶液中析出，从而达到分离的一种技术。 沉淀法也称溶解度法。其基本原理是：根据各种物质的结构差异（如蛋白质分子表面疏水基团与亲水基团之间比例的差异）来改变溶液的某些性质(如pH、极性、离子强度、金属离子等)，就能使抽提液中的有效成分的溶解度发生变化。 二、制备蛋白质 1. 盐析法 2. 有机溶剂沉淀法 3. 蛋白质沉淀法 4. 聚乙二醇沉淀法 5. 选择性沉淀法 6. 结晶沉淀法 1. 盐析法 (1) 盐分级沉淀 (2) 盐析曲线制作 (3) 盐析的影响因子 (4) 脱盐 a.溶解度大，对温度不敏感.(水的温度=25℃，硫酸铵的饱和溶解度=769g,当水的温度=0℃时，其饱和溶解度高=679g,这是其他盐类所不具备的。) b.分级效果好.有些抽提液经过加适量硫酸铵的一步分级沉淀处理后，就可除去杂蛋白75％以上； c.有稳定蛋白质结构的作用.将2-3 mol／L硫酸铵盐析的蛋白质置低温下保存一年，其性质没有变化； d.