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Imatinib对c—Kit阳性多发性骨髓瘤细胞抑制增殖及诱导凋亡相关机理研究 诱导凋亡相关机理研究 专 业：血液内科 硕士生：黄蓓晖 指导老师：李娟教授 中文摘要 一、 背景 多发性骨髓瘤(multiple 病。近年MM的发病率有上升趋势，对人们的生命和生存质量已经构成越来越严 重的威胁。虽然目前针对MM的治疗有多种治疗方案，但它仍然是不可治愈的疾 病。如何治疗难治复发MM及提高它们的疗效是目前临床急需解决的问题。 c—Kit是一种ⅡI型跨膜酪氨酸蛋白激酶受体。已有报道在MM中恶性浆细胞 而非正常浆细胞c—Kit有一定比例的表达，可能可以作为难治复发性MM治疗的 一个新靶点。Imatinib，是第一个特异性针对小分子酪氨酸激酶的抑制剂，最早 临床获得80％以上的缓解。 的传递抑制肿瘤的发生，针对c—Kit在多发性骨髓瘤中有一定比例的表达，我们 Imatinib对c-Kit阳性多发性骨髓精细胞抑制增殖及诱导凋亡丰H关机理研究 制c．Kit阳性的MM细胞株，并进一步了解其抑制增殖和诱导凋亡的作用机制， 为格列卫在MM中的临床应用奠定一定的理论基础。 二、 实验方法和结果 1．Imatinib可以抑制c．Kit受体传导通路 1．1 Imatinib可以抑制IL．6对c．Kit的促磷酸化作用 首先了解MM的一个重要生长因子IL一6是否可以促进c．Kit受体的磷酸化水 平。用IL．6刺激无血清培养后的KM3细胞，用WB法检测c．Kit的磷酸化水平， 以明显阻断IL．6对c．Kit的促磷酸化作用。 1．2Imatinib可以抑制c．Kit的表达 表达下调。 2．Imatinib对KM3细胞增殖和凋亡的影响 2．1 Imatinib可以抑制KM3细胞的增殖 理KM3细胞48h后检测吸光度，发现浓度小于等于O．1 1ttmol／L时，Imatinib可以 增殖，呈浓度依赖性。48h的IC50为O．331．tmol／L(Po．01)。进一步研究发现， 外源性IL-6不能阻断lmatinib的抑制增殖作用(P=O．2)。 2．2lmatinib阻断KM3细胞在G0／Gl期 采用流式细胞技术检测不同浓度Imatinib处理后KM3细胞周期分布情况， 通过阻滞细胞在G0／GI期抑制细胞增殖。 Ⅱ Imatinib对c—Kit阳性多发性骨髓瘤细胞抑制增殖及诱导凋r：相关机理研究 2．3Imatinib可以促进KM3细胞的凋亡 用ArmexinV／PIFITC双标染色法检测细胞早期凋亡，发现与空白对照相比， 用lmatinib处理后KM3细胞早期凋亡和晚期凋亡的细胞较对照组均明显增加， 随着浓度的增大，早期凋亡细胞减少，晚期凋亡细胞增多，总凋亡率增加。用 DNA凝胶电泳法检测细胞晚期凋亡，发现经处理后DNA凝胶电泳出现凋亡的特 逐渐下降，cleaved PARP表达增加。 caspased一3表达增加，cleaved 3．Imatinib对几条MAPK通路的影响 3．1 Imatinib对ERKl／2通路的影响 率没有增加。 乎完全抑制MEKl／2的磷酸化水平，阻断外源性IL．6的促磷酸化作用。 3．2 MAPK通路的影响 Imatinib对p38 0．19mol／L的lmatinib可以促进p38 时，则可以抑制p38MAPK的磷酸化。p38 用有明显拮抗作用，可以拮抗Imatinib的抑增殖和促凋亡作用。 3．3Imatinib对ERK5通路的影响 IL一6可以促进ERK5的磷酸化水平。0．1 化水平没有明显影响，也没有减弱IL．6对KM3的促磷酸化作用；浓度增大至 III Imatinib对C-Kit阳性多发性骨稻蝻细胞抑制增殖及诱导凋亡相关机理研究 蛋白表达均呈浓度依赖性