cetuximb逆转缺氧环境下胃癌细胞化疗耐药性及其机制的研究.pdfVIP

Cetuximab逆转缺氧环境下胃癌细胞化疗耐药性 及其机制的研究1 硕士研究生： 骆卉妍 导 师： 徐瑞华副教授 专 业： 肿瘤学 中文摘要 1．研究背景 晚期胃癌缺乏有效的治疗方法，预后不佳，有必要寻找新的治疗手段和药物。缺氧 是促进恶性肿瘤发展的关键因子之一，可诱导肿瘤细胞对化疗和放疗产生耐受性，促进 肿瘤细胞的生长、浸润和转移。HIF．1是调节细胞对氧浓度改变的主要因子。HIF．1是 表达．HIF．1a可调控超过60种的下游靶基因，参与到能量代谢、血管生成、细胞的增 值等生理活动中，其中包括VEGF．细胞氧浓度、肿瘤的遗传基因、细胞因子(如EGF 等)可调节HIF．1a的蛋白表达。细胞因子激活相应的酪氨酸激酶受体后，信号可通过P13 一ⅪAKT和Elu“MAPK信号转导通路调节HIF．1a蛋白的合成和功能转化． 肿瘤中均有高表达，包括胃癌、结肠癌，头颈癌等，在胃癌中的表达率高达50％--74 ％。EGFR与其配体EGF、TGRa等结合后，可诱导受体二聚体形成，激活多条下游信 号传导通路，对肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭及新生血管形成均有促进作用。EGFR 的高表达与肿瘤的预后不良、短期复发以及放化疗敏感性降低等直接相关。 与多种化疗药物联合均有协同抗肿瘤作用．Cctuximab已证实在多种肿瘤中有很好的疗 效，遗憾的是，到目前为止，Cetuximab联合化疗用于治疗胃癌的临床研究资料非常缺 乏。 基于以上研究基础，我们假设，Cetuximab在缺氧环境下可提高胃癌细胞对化疗药 合成，进而参与抑制VEGF的表达。 2．研究方法 缺氧状态下，采用直接细胞计数法测定细胞生长状况；MTT法测定Cetuximab、 V-FITCand Oxaliplatin、以及两药联合的细胞毒作用；采用AnnexinPropidiumIodide(PI) 双染法通过流式细胞仪检测细胞调亡：提取用不同方法处理后的细胞总蛋白，用免疫印 的表达情况，应用人抗VEGF单克隆抗体的ELISA试剂盒检测不同方式处理的细胞分 泌的VEGF蛋白浓度。 3．研究结果 3．1 缺氧和Cctuximab对胃癌细胞生长的影响 缺氧环境下胃癌细胞的生长速度低于正常氧状态。Cetuximab对胃癌细胞的生长无 明显抑制作用。Oxaliplatin可抑制胃癌细胞的生长，且在缺氧状念下，细胞生长受抑制 的作用明显低于正常氧状态。两药联合应用后，抑制胃癌细胞生长的作用增强，MGC803 这种协同作用在缺氧环境下表现更为显著。 3．2缺氧和Cetuximab对胃癌细胞化疗敏感性的影响 4 药的作用更明显。 3．3Cetuximab和oxanplatia在不同氧状态下对胃癌细胞调亡的作用 ． SGC7901细胞产生凋亡，且调亡产生的比率呈剂量和时间依赖性。缺氧状态下 态和缺氧状态下Oxaliplatin诱导细胞凋亡的作用，而缺氧状态下联合治疗增加的细胞凋 亡的百分比要明显高于正常氧状态下增加的细胞凋亡百分比． 3．4Ceteximab对信号通路的作用 Westem 3．5 显下调，尤以缺氧状念下调更为明显． 4．结论 1． ， Oxaliphtin的药物敏感性，诱导耐药性的产生，抑制促进细胞凋亡的作用，诱导 HIF．In的过表达。 2． 3．Cetuximab逆转缺氧状态下细胞产生的耐药性的分子机制，可能是通过抑制 4． 泌。 5．HIF．In介导的血管生成和能量代谢在肿瘤的发生发展过程中有着很重要的作 新策略。 5．关键词 亡；P13．K／AKT途径；ERK／MAPK途径； Cctuximabovercomes resistancein cancercelllines drug g