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MicroRNAlet．7家族在膀胱癌中表达及在其演进中作用机理的初步探讨 MicroRNA let-7家族在膀胱癌中 表达及在其演进中作用机理的初步探讨 中山大学附属第二医院泌尿外科 硕士研究生： 胡明 导 师： 黄健教授 摘 要 膀胱癌是最常见的恶性肿瘤之一，在我国的泌尿生殖系肿瘤中其发病率和死 亡率均占首位【l】。膀胱肿瘤极易复发，术后复发率高达60％～80％，且肿瘤的恶 性程度、浸润能力随着复发次数的增加往往也随之增强。目前，导致膀胱癌发生 的明确的分子遗传学因素尚未完全清楚，因此，从膀胱癌的发病机理出发，研究 膀胱癌的致病基因，对于预防和治疗膀胱癌具有积极的临床指导意义。 苷酸的单链小分子RNA，广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序 列RNA眩枷。近年来研究表明miRNA可能是一类进化上相对保守的RNA分子， 在细胞的分化、增殖和凋亡，个体发育、机体代谢以及病毒感染中都具有重要的 作用，miRNA序列结构丰度和表达方式的多样性，使其可能作为蛋白质编码 mRNA的强有力的调节子。新近研究表明miRNA的异常表达在多种肿瘤的发生 发展中起着重要作用【5-91。 本课题共分为三个部分：l、膀胱癌miRNA的表达；2、膀胱癌miRNAlet．7 家族及其靶基因的分析验证；3、膀胱癌miRNAlet．7家族的功能学分析。 第一部分 目的对膀胱癌组织和正常膀胱组织中的miRNA进行分析，初步筛选膀胱 癌组织及正常膀胱组织中差异性表达的miRNA，找出明显上调或下调的miRNA。 材科与方法挑选2例膀胱癌患者的癌组织和正常膀胱组织，分别提取其Total MIcr0RNAlet-／家族在膀恍痛中表达及在其演进中作用机理的初步探讨 结 论初步筛选出膀胱癌组织与正常膀胱组织中差异性表达的miRNA，更有说服 力和具体的结果有待于加大样本量和进一步的验证分析。 第二部分 目的对miRNA芯片中的特定miRNAlet．7家族进行进一步的分析验证， 并根据已发表文献的生物信息学分析结果，研究let．7家族的预测靶基因Ha-RAg 蛋白在膀胱癌组织、正常膀胱组织及膀胱癌细胞株T24中的表达特点。材料与 方法 根据膀胱癌组织和正常膀胱组织的差异性表达的miRNA，找出感兴趣的 miRNA——let．7家族。(1)采用Northern blotting技术检测膀胱癌组织、正常 膀胱组织及膀胱癌细胞株T24中miRNAlet．7家族的表达，并用U6作为内参； (2)采用Western blotting技术检测膀胱癌组织、正常膀胱组织及膀胱癌细胞株 癌组织及膀胱癌细胞株T24中表达较正常膀胱组织有明显降低，Ha-R．AS蛋白在 膀胱癌组织及膀胱癌细胞株T24中表达较正常膀胱组织有明显升高。结论 1et．7家族表达特点的分析验证结果与第一部分miRNA芯片结果基本吻合，且肿 瘤组织和肿瘤细胞株T24中1et．7家族表达的上调与Ha．RAS蛋白的下调可能存 在某种联系。 第三部分 目的对1et．7家族进行功能学分析及鉴定，观察1et．7家族与Ha-RAS蛋白 染至膀胱癌细胞株T24内，分别采用MTT、RT-PCR、Western blotting技术检测 成功转染后的膀胱癌细胞株T24的生长情况，Ha-RASmRNA的表达特点及 结果成功转染pre-miRaM Ha-RAS蛋白的表达特点，并用争aetin作为内参。