乙型肝炎病毒相性肾炎尿液蛋白质组学的初步分析.pdf

乙型肝炎病毒相关性肾炎尿液蛋白质组学的初步分析 硕士生姓名：王 媛 指导教师：赵久阳 教授 指导小组：梁 振 副研究员 刘春艳 副教授 生·JoI 杰●’’ 副教授。rIn 一● 专业名称：内科学 摘 要 目的：研究乙型肝炎病毒相关性肾炎患者的尿液蛋白质谱特点， 并与原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎患者及健康人尿液蛋白质谱进 行比较，筛选出乙型肝炎病毒相关性肾炎尿液中差异表达的蛋白质， 探讨质谱技术对该病的临床诊断意义。 方法：留取健康人(n=3)、原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎(n=3) 及乙型肝炎病毒相关性肾炎患者(n=6)的空腹清洁中段晨尿标本，避免 细菌生长和蛋白酶解于1小时内放置于．80℃冰箱保存备用。取出12 份标本溶解完全后，用直径O．221工m的微孔超滤膜过滤除去较大的杂 质，再用．20℃预冷丙酮进行蛋白沉淀，置于．20℃冰箱过夜后，经 4℃4000xg离心20分钟，弃上清液，留取含尿蛋白的沉淀物，真空干 燥浓缩。浓缩干燥的蛋白沉淀物用PBS充分溶解后应用Bradford法测 定蛋白浓度。据测定的标本蛋白浓度称取每例样品含lmg蛋白质的混 合固体，充分酶解后调整蛋白浓度为l 析，得到的肽序列结果用MASCOT软件行数据库检索，所用的库为 查询所表达的蛋白质名称、蛋白的作用及细胞学定位等相关信息。 01神蛋白质，通过手工 结果：健康人3份尿液标本中共鉴定出1 验证，所有3份标本共同表达了37种蛋白质。原发性肾小球肾炎伴慢 性乙型肝炎患者的3份尿液标本共鉴定出73种蛋白质，所有3份标本 中共同表达了l5种蛋白质。乙型肝炎病毒相关性肾炎患者的6份尿液 9种蛋白质。 标本共鉴定出206种蛋白质，所有6份标本共同表达了1 从乙型肝炎病毒相关性肾炎患者共有的‘19种蛋白质中手工剔除检测出 的健康人及原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎患者尿液中也存在的蛋 白质，还剩余9种蛋白质，它们分别是血浆铜蓝蛋白、0【l一抗胰凝乳蛋 结合蛋白、前列腺素D2合酶、未命名蛋白(C9JAM6)。 结论：本实验利用HPLC—ESI．MS／MS技术研究了乙型肝炎病毒相 关性肾炎患者的尿液蛋白质谱特点，得到206种蛋白质，并与健康人及 原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎患者尿液蛋白谱进行比较，尿液中 有特异性表达的a1-抗胰凝乳蛋白酶、前列腺素D2合酶、血浆铜蓝蛋 白、维生素D结合蛋白有可能成为乙型肝炎病毒相关性肾炎的生物标 志物。 关键词：蛋白质组学 乙型肝炎病毒相关性肾炎 尿蛋白 生物标志 物 on Primary Urine Study Proteomicsin B Hepatitis Virus associated Glomerul ritis oneph Master degree candidate：wangyuan Supervisor：ProfessorZhao J