猪骨髓间充质干胞体外向心肌样细胞分化过程中notch4下调.pdfVIP

摘要 stem cells，MSCs)体外培养自发 目的：检测猪骨髓问充质干细胞(Mesenchymal 分化和诱导分化过程中Notch4 体对MSCs体外向心肌细胞分化的影响。 方法：密度梯度离心法分离中华小型猪骨髓单个核细胞，贴壁培养法筛选出 MSCs体外培养，原代(P0)培养后按l：2比例每3天传代一次。选取第1，2， 测自发分化和5．氮胞苷诱导分化状态下它们Notch4mRNA水平和Notch4蛋白 Time 表达量的差异。Real RT-PCR定量检测细胞Notch4mRNA表达量，以及心 同细胞Notch4蛋白的表达水平；免疫细胞化学染色法检测MSCs的表面标志 肌肌动蛋白(a-sarcomeric cTn．T)和连接蛋白43(connexin 43，Cx43)；以透射电镜观察分化细胞超微结构。 结果：5天可见贴壁圆形的MSCs逐渐出现多角状突触，呈长梭形，经过7—10 0，P 天培养，原代(passageO)MSCs形成均一的细胞克隆，融合70．80％；1：2 传代以后第二天细胞即可贴壁生长，细胞为多角长梭形，数量增殖到较多时呈漩 涡状生长。免疫细胞化学表型鉴定CD45(．)，CD29(+)，CD90(+)。 猪骨髓来源的MSCs在体外正常培养状态下，随着培养时间的延长(P0．P4)， 细胞之间的连接增多(Cx43表达量上升)，心肌特异性标志物增多(cTIlI表达量 Notch4的基因表达与对照组相比无明显变化，Notch4阳性细胞与对照组相比显 著减少，各代MSCs可以生成更多的细胞连接，但是心肌特异性标志物无显著 变化。 结论：猪骨髓间充质干细胞体外向心肌样细胞分化过程中Notch4下调。 关键词：Notch通路Notch4骨髓间充质干细胞分化心肌细胞 Abstract on theeffectofNotch4the of stemcells Objectives：Toexplore processmesenchymal into thelevelofNotch4mRNA (MSCs)differentiationby cardiomyocytemeasuring andNotch4 trends invitroculturestimulatedwithorwithout proteinchangingduring 5-azacytidine． Methods：Mononuclearcellswereisolatedfrombonemarrow fromChinese aspirated mini—swine invitro by densitygradientcentrifugationthrough1．0779／mlPercoll．By andadherence canbeenrichedand screening，MSCs continuously culturing passaged． neculturedMSCsinvitroweresub·cultured3 ina ratiosof1：2after everydays Split